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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測(cè)的即用型 PCR 試劑盒,，可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR 分析,。產(chǎn)品含有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液組分,、Taq DNA 聚合酶、dNTPs,、MgCl2,、 SYBR Green I 及耐熱 RNase H 等所有實(shí)時(shí)定量 PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 反應(yīng),，具有廣泛的用途,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.方便，用戶只需準(zhǔn)備模板和引物即可以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 實(shí)驗(yàn),。

2.含有耐熱 RNase H,可以抑制殘存 mRNA 對(duì) PCR 反應(yīng)的作用,。

3.產(chǎn)品為 2×預(yù)配液，操作步驟已經(jīng)最大限度地簡(jiǎn)化,，能減少污染,，降低實(shí)驗(yàn)誤差。

4.擴(kuò)增效率和靈敏度更高,。

5.快捷,，即用型的預(yù)配液使加樣操作步驟簡(jiǎn)化，避免了交叉污染,，降低實(shí)驗(yàn)誤差,。

6.各成分的濃度和比例都經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高,，特異性強(qiáng),。

7.本規(guī)格有 1mL，足夠 100 次 20uL 體系的染料法熒光定量 PCR,。

8.2×染料法 qPCR MasterMix（含 RNase H） 2×只供科研使用,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

2×染料法 qPCR MasterMix

（含 RNase H）1mL1.5mL 棕色管

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,有效期一年,。

自備試劑

DNA 模板,、引物、超純水,。

使用方法：

1. 如果有 N 個(gè)樣品（最好含一個(gè)樣本制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣本制備陰性對(duì)照）并且做定量分析,，最好設(shè)置 N+7 個(gè)反應(yīng)，多出的 7 個(gè)中,，6 個(gè)用于 6 點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，一個(gè)是擴(kuò)增陰性對(duì)照（NC）。在 N+7 個(gè) PCR 管中,，加入下列成分,。如果是做定性分析，則 6 個(gè)做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品縮減成一個(gè)擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照（PC），用戶自己需要

根據(jù)下表進(jìn)行適當(dāng)修改（把 6 個(gè)標(biāo)曲反應(yīng)改成 1 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)）,。

成分N 個(gè)樣品管6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線管NC 管

2×染料法 qPCR MasterMix

（含 RNase H）各 10uL各 10uL10uL

自備引物 1（10uM）各 1uL各 1uL1uL

自備引物 2（10uM）各 1uL各 1uL1uL

自備基因組 DNA10-100ng不加不加

或自備 cDNA1-10ng不加不加

自備陽(yáng)性對(duì)照模板（6 各梯度）不加各 1uL不加

陰性對(duì)照模板(一般用水)不加不加1uL

自備 50×自備 ROX I

或 ROX II 染料(見(jiàn)附)各 0.4uL各 0.4uL0.4uL

補(bǔ)超純水到20uL20uL20uL

2.放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增,下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考。

3.通過(guò)溶解曲線分析的結(jié)果排除無(wú)效數(shù)據(jù),。有 Ct 值,，但 Tm 值跟擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照 Tm 不一樣的樣品（包括對(duì)照和待測(cè)樣品），歸為假陽(yáng)性,，數(shù)據(jù)無(wú)效,，不予以分析。Tm 跟擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照 Tm 一致的,，為有效 Ct,。

4.如果兩種陰性對(duì)照（樣本制備陰性對(duì)照和擴(kuò)增陰性對(duì)照）的溶解曲線所得 Tm 值跟擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照的Tm 值一樣，說(shuō)明環(huán)境或試劑可能有過(guò)去的PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物污染,， 則此次實(shí)驗(yàn)無(wú)效,，需要解決污染問(wèn)題再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

5.如果兩種陰性對(duì)照（樣品制備陰性對(duì)照和 PCR 陰性對(duì)照）是假陽(yáng)性,，可以繼續(xù)分析其它樣品有效數(shù)據(jù),。

6.對(duì)定量檢測(cè)，以 6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的濃度的 log 值為橫軸,，以有效 Ct 值為縱軸,， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的有效 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log 值,，再換算出待測(cè)樣品的 DNA 濃度,。

7.對(duì)定性檢測(cè)，則得到有效 Ct 值的樣本為陽(yáng)性,，無(wú)有效 Ct 值的為陰性,。附：

下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊(cè)為準(zhǔn),。

1 ． 不需要 ROX 的機(jī)型： Agilent MX3000 和 MX4000 ,、iCycler IQ 、Light Cycler480,、Smart Cycler System,、Thermal Cycler Dice Real Time System等型號(hào)的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會(huì)影響整個(gè) PCR 分析,。

2.需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000,、7300、7700,、7900HT,、Step One、 Step One Plus。

3.需要使用 ROX II 的機(jī)型： ABI Prism7500,、7500Fast,、MJ Opticon、MJChromo4,、Corbett Rotor Gene 3000,。

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