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產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品利用酶法對 DNA 進行片段化,。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用,，用戶不用單獨購買各種成分并進行優(yōu)化。

2.操作簡便省時,，只需要在樣本中加入片段化酶,，再反應(yīng)一段時間即可。

3.跟后續(xù)的高通測序（NGS）兼容,。

4.安全無毒,，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味,。

5.性價比高,。

6.本產(chǎn)品足夠 20 次 DNA 片段化反應(yīng)。

7.DNA 片段化試劑盒（酶法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

片段化酶 120μL0.5mL 紅蓋管

片段化酶 1 稀釋液1040μL1.5mL 綠蓋管

DNA 片段化溶液 A20μL0.5mL 白蓋管

DNA 片段化溶液 B50μL0.5mL 白蓋管

DNA 片段化反應(yīng)終止液400μL0.5mL 本色管

150 mM MgCl2 溶液40μL0.5mL 本色管

片段化酶 2 稀釋液200μL0.5mL 綠蓋管

片段化酶 220μL0.5mL 紅蓋管

DNA 級 EDTA 溶液50μL0.5mL 本色管

超純水1mL×101mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸,、-20℃保存,，有效期一年。

自備試劑

電泳上樣緩沖液,，推薦使用 Orange G 作為電泳示蹤劑,，因為溴酚藍（BPB）和

二甲苯青（Xylene Cyanol）與 DNA 片段重疊，應(yīng)避開使用,。

使用方法：

一,、基因組 DNA 片段化反應(yīng)

1.確定反應(yīng)體積。

2.基因組 DNA 在 100ng 以下使用 10μL 反應(yīng)體系,；基因組 DNA 在 100ng～ 1μg 之間使用 20μL 反應(yīng)體系,。注意：基因組 DNA 超過 1μg 時，以 1μg/20 μL 的反應(yīng)體系增加反應(yīng)管數(shù)或擴大反應(yīng)體系,，很好地為 5μg/100μL,。

3.將 2 臺 Thermal Cycler PCR 儀的溫度分別設(shè)定為 16℃和 70℃。只有 1 臺

儀器時設(shè)定為 16℃,。

4.在冰上將基因組 DNA 以外的下列試劑添加到 0.2mL 反應(yīng)管中,，配制混合液，充分混勻后再加入基因組 DNA,。用移液槍輕輕吸打或用手輕彈管壁,，離心后使用，避免產(chǎn)生氣泡,，不能使用振蕩器混勻。

注意：以上為基因組 DNA 1μg/20μL 反應(yīng)體系,；如果基因組 DNA 量少,，那么要調(diào)整為適合的體系。

5.片段化酶 1 的稀釋（使用前新鮮調(diào)制）,。稀釋方法如下：在冰上按下列順序在1.5mL 反應(yīng)管中加入 450μL 超純水和 50μL 片段化酶 1 稀釋液,，充分混勻。輕輕振蕩離心,。將 1μL 的片段化酶 1 加入到配好的混合液中,，然后將 200μL的移液槍調(diào)到 100μL 刻度后，輕輕吸打 10 次左右,，避免產(chǎn)生氣泡,。再上下顛倒混勻（5 次以下），離心,。不能使用振蕩器混勻,。注意：稀釋后的片段化酶 1 請在 10 分鐘內(nèi)使用，不能保存,。

6.確認 Thermal Cycler PCR 儀的溫度在 16℃后,，將 1μL 稀釋后的片段化酶 1添加到上述加入基因組 DNA 的混合液中,。吸打數(shù)次后，立即在 16℃條件下進行反應(yīng),。推薦反應(yīng)時間 5-8 分鐘,。注意：在冰上進行試劑添加和混勻的操作。

7.不要移動反應(yīng)管,，在 Thermal Cycler PCR 儀上直接加入 20μL 的 DNA 片段化反應(yīng)終止液終止反應(yīng),。用移液槍吸打 2-3 次后，再轉(zhuǎn)移到冰上吸打數(shù)次,。

8.確認 Thermal Cycler PCR 儀溫度為 70℃后,，將吹打后溶液的 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到 PCR 儀上。

9.70℃反應(yīng) 5 分鐘后,，轉(zhuǎn)移到冰上,。注意：在冰上放置 2 分鐘以上。

10.只進行 DNA 片段化反應(yīng)時,，在冰上放置后的 0.2mL 反應(yīng)管中加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液,，用移液槍吸打，充分混勻后,，進行 DNA 片段的精制,。

二、末端平滑化反應(yīng)

11.將兩臺擴增儀分別設(shè)定為 16℃和 70℃,。如果只有一臺,，則設(shè)定為 16℃。

12.片段化酶 2 的稀釋（使用前調(diào)制）,。稀釋方法：在冰上準備 0.2mL 反應(yīng)管,，試劑按下述的比例（片段化酶 2 稀釋液:片段化酶 2=9:1）配成混合液后,，輕輕吸打,，充分混勻,，避免產(chǎn)生氣泡,。

13.在在冰上放置后的 0.2mL 反應(yīng)管中加入 2μL 的 150mM MgCl2 溶液,，移液槍吸打，充分混勻，避免產(chǎn)生氣泡,。不能使用振蕩器混勻。

14.將 2μL 稀釋后的片段化酶 2 添加到 0.2mL 反應(yīng)管中,，吸打數(shù)次混勻后，立即在 16℃反應(yīng) 10 分鐘,。注意：此步操作在冰上進行,。

15.反應(yīng)結(jié)束后，把 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到冰上,。只有一臺擴增儀時,，把溫度調(diào)至 70℃。

16.加入 1μL 的 0.5M EDTA 溶液,，充分吸打混勻后離心,。

17.確認 Thermal Cycler PCR 儀設(shè)定的溫度為 70℃后,，將 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到 Thermal Cycler PCR 儀上反應(yīng) 5 分鐘,。

18.將 0.2mL 反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到冰上,。

19.片段化 DNA 的確認：取相當于 200～250ng 量基因組 DNA（在冰上放置后） 的反應(yīng)液約 10μL 進行 1.5%瓊脂糖凝膠電泳,。

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