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產(chǎn)品簡介：

TRAP 專用細胞裂解液通常用于端粒酶重復片段擴增（TRAP）實驗中,，以提取細胞中的端粒酶,。其作用是裂解細胞,，釋放出細胞內(nèi)的端粒酶,，以便后續(xù)進行端粒酶活性的檢測,。本產(chǎn)品只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

10mL

運輸及保存

低溫運輸,，-20℃保存，有效期一年,。

自備試劑

無

使用方法：

BCA 蛋白濃度測定試劑盒 ,，PBS。

注意：端粒酶的組成成分中有 RNA,，極容易被降解,，因此，提取端粒酶應該跟提取 RNA 一樣,，盡量在低溫條件下快速操作,、最好使用本公司的固相 RNase 清除劑預先清潔試驗臺面等容易有 RNase 污染的地方。

1.對冷凍的實體組織：將 50-100 mg 在-80℃冷凍的組織放裝有液氮的研缽中研磨成粉末,，再轉(zhuǎn)移到預冷的玻璃勻漿器中,，加入 200 μL 預冷的 TRAP專用細胞裂解液,，溫和手動勻漿 6 次后冰浴 30 分鐘，每間隔 5 分鐘渦旋振蕩一次,，然后直接進入第 4 步操作,。

注意：為保證裂解效果，可在顯微鏡下觀察確保大部分細胞已經(jīng)裂解,。如果組織樣品不足 50-100 mg,，可以按比例降低TRAP專用細胞裂解液用量。在-20℃保存的實體組織放置 2 個月后就失去端粒酶活性,，而在-80℃保存的實體組織放置數(shù)年還有端粒酶活性,。

2.對新鮮的培養(yǎng)細胞和組織：用自備的預冷 PBS 洗滌 1E6 個經(jīng)過胰-酶處理的細胞或 50-100 mg 經(jīng)過胰-酶處理的新鮮組織，3000 g 4℃離心 5 分鐘,，棄上清,，細胞沉淀可以直接使用，也可以放-80℃保存后續(xù)使用,。在細胞或組織沉淀中加入200 μL 預冷的 TRAP專用細胞裂解液,，輕柔吹打 3 次懸浮細胞或組織。對新鮮細胞：渦旋振蕩 10 秒后置冰浴 30 分鐘,，每間隔 5 分鐘渦旋振蕩一次,。對新鮮組織：在冰上用玻璃勻漿器輕柔勻漿后冰浴 30 分鐘，每間隔 5 分鐘渦旋振蕩一次,。如果細胞不足 1E6 或 50-100 mg,，按比例降低 TRAP專用細胞裂解液用量。

3.14000 g 4℃離心 20 分鐘,，收集 160 μL 上清,，留 40 μL 不取。

4.取部分上清液用自備 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定總蛋白濃度,。

5.測出各樣品的蛋白濃度后,，用 TRAP專用細胞裂解液將各樣品的蛋白濃度調(diào)成 3 μg/μL，然后分裝合適的量到離心管中,，將實驗所需的數(shù)量放冰上待用,，其余的放-80℃長期保存（可存放一年）,。此步所得樣本稱為端粒酶待測樣本,。

6.對每個樣本，一次實驗需要兩管,，一管用于測定端粒酶活性,，一管用作該待測樣本的熱滅活陰性對照。制備方式是每個樣本取一管端粒酶待測樣本,，95℃處理

10 分鐘滅活端粒酶,，放冰上待用,。沒有用完的可放-80℃長期保存（可存放一年）供下次使用。

7.按常規(guī)操作進行后續(xù)的端粒酶檢測實驗,。

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