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產(chǎn)品簡介：

羥基萘酚藍(lán)（Hydroxy Naphthol Blue,，HNB）的 CAS 號為 165660-27-5，其分子結(jié)構(gòu)式如下：

羥基萘酚藍(lán)(HNB)是一種金屬離子指示劑,LAMP-HNB 的變色原理為:HNB 與鎂離子結(jié)合使得反應(yīng)體系初始顏色為紫羅蘭色,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,鎂離子與析出的焦磷酸根離子反應(yīng)生成焦磷酸鎂沉淀,羥基萘酚藍(lán)失去了鎂離子使得體系顏色變?yōu)樘焖{(lán)色,而未反應(yīng)的體系則仍保持著紫羅蘭色,。另外,HNB 可以在 LAMP 反應(yīng)前加入,有效的減少了反應(yīng)污染的可能性。本產(chǎn)品就是專門用于 LAMP 擴(kuò)增的羥基萘酚藍(lán)溶液,，其濃度為 12 mM,。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用，可以直接加入到含 Mg 的 LAMP 擴(kuò)增體系中使用。

2.本產(chǎn)品的最佳用量根據(jù) LAMP 體系不同需要用戶自己優(yōu)先選擇,，但一般終濃度為 25 ?M 左右,， 需要終濃度為 0.5 mM 的 Mg 離子存在，并且 Mg 離子濃度跟標(biāo)準(zhǔn) LAMP 反應(yīng)的 Mg 離子濃度一樣,。

3.本產(chǎn)品只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

LAMP 專用羥基萘酚藍(lán)溶液，12mM

1 mL1.5 mL 棕色管

使用手冊1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

1.將本產(chǎn)品放置在室溫融化 30 分鐘,，震蕩 10 秒鐘,，短暫離心后放冰上待用。

2.按下表設(shè)置 20 ?L 體系的 LAMP 反應(yīng)：

成份樣品管陰性對照

4×LAMP Mix5?L5?L

自備 FIP 引物終濃度0.8 ?M0.8 ?M

自備 BIP 引物終濃度0.8 ?M0.8 ?M

自備 F3 引物終濃度0.2 ?M0.2 ?M

自備 B3 引物終濃度0.2 ?M0.2 ?M

自備 Loop F 引物終濃度（可選項）0.4 ?M0.4 ?M

自備 Loop B 引物終濃度（可選項）0.4 ?M0.4 ?M

自備模板 DNA1-100ng不加

Bst DNA 聚合酶(8U/?L)1.5 ?L1.5 ?L

自備 MgCl2 溶液,，5 mM2 ?L2 ?L

加本產(chǎn)品到終濃度25 ??左右25 ??左右

補(bǔ)水到20 ?L20 ?L

3.65℃保溫 1 小時,。

4.LAMP 擴(kuò)增后用肉眼觀察，有核酸擴(kuò)增的將變色,，管中液體顏色由紫羅蘭色變?yōu)樘焖{(lán)色,。沒有擴(kuò)增的將不變色,，管中液體顏色仍為紫羅蘭色。典型的實驗結(jié)果如下圖（左邊為陰性結(jié)果,，右邊為陽性結(jié)果）：

5.也可以電泳檢測實驗結(jié)果（強(qiáng)烈不推薦此法，因為電泳時產(chǎn)生的氣溶膠非常容易污染環(huán)境,，使得今后用同一引物擴(kuò)增時產(chǎn)生假陽性）：取 5-10 ?L 擴(kuò)增產(chǎn)物和自備的上樣液混合,，上樣，進(jìn)行 2-3%的瓊脂糖凝膠電泳,，有 LAMP擴(kuò)增的樣品將可見 LAMP 特征性電泳圖譜,。

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