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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

昆蟲(chóng)RNA純化試劑盒（過(guò)柱法）是專門(mén)用于從富含多糖,、糖蛋白,、粘蛋白的動(dòng)物樣品（尤其是昆蟲(chóng)樣品） 中提取總 RNA 的試劑。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.操作簡(jiǎn)單快速,，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘,。

2.RNA 純度高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右,，能夠有效去除大多數(shù)昆蟲(chóng)中的多糖污染。

3.適用于各種昆蟲(chóng)組織,，每 100mg 組織能提取到 20-30 μg 總 RNA,。

4.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交,、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn),。

5.一站式，提供 RNase-free 的樣品收集管,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝材料

昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 A50 mL60 mL 本色瓶

昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 B15 mL15 mL 棕玻瓶

昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 C50 mL60 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存,，昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 B 最好放 4℃長(zhǎng)期保存，有效期一年,。

自備試劑

氯仿,。

使用方法：

1.將 50-300 mg 昆蟲(chóng)組織放入 10-15 mL 塑料離心管中，加入 1 mL 昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 A,，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒,。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果,。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲(chóng)組織,，硯磨完后加入 1 mL 昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 A。注意：溶解昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 A 沉淀,。昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 A 在 4℃ 放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹-底溶解并充分搖勻后再取用。

2.將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中（可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片）,。

3.在離心管中加入 0.3 mL 的昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 B 和 0.2 mL 自備氯仿,，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻,，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來(lái),。

4.室溫 12,000 rmp 離心 3-5 分鐘,，兩相間將有約 5-10 毫米厚的細(xì)胞破碎物。

5.將上清液（約 0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中,，下層有機(jī)相和中間層含有 DNA,、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取,。最好留下 100 μL上清液不取,。

6.加入等體積的昆蟲(chóng) RNA 純化溶液 C，充分顛倒混勻,。

7.將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,，12,000 rmp 室溫離心半分鐘，棄穿透液,。

8.將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,，12,000 rmp 室溫離心半分鐘，棄穿透液,。

9.加 0.7 mL 通用洗柱液,，室溫 12,000 rmp 離心半分鐘，棄穿透液,。

10.加 0.3 mL 通用洗柱液,，室溫 12,000 rmp 離心半分鐘，棄穿透液,。此步可以省略,。

11.室溫 12,000 rmp 離心半分鐘。此步十分重要,，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的使用,。

12.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 μL RNA 洗脫液,，室溫放置 1-2 分鐘,。

13.12,000 rmp 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品,，可以立即使用或存放于-80℃待用,。

14.RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變 性 膠 進(jìn) 行 RNA 電 泳 ,， 因 為 非 變 性 膠 不 能 分 離 所 有 的 RNA 分 子

（BioTechniques,，28：414，2000）,。注意：大部分昆蟲(chóng)的 28S RNA 被切

割成兩個(gè)小的片段,，彼此用氫鍵相連,，所以在甲醛變性膠中，沒(méi)有 28S 帶出現(xiàn)

（文獻(xiàn)見(jiàn)：Eva C. Winnebeck,，Craig D. Millar and Guy R. Warman,，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7）

15.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10 μLRNA 溶于 TE 緩沖液中（pH 7.5-8.2 之間）檢測(cè)其在 OD260 的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260 的RNA=40 μg/mL）,，進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積）和產(chǎn)率（RNA 產(chǎn)量/組織用量）,。

16.RNA 純度測(cè)定：無(wú)污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間（具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)），高于此范圍則分別表示樣品  可能有蛋白質(zhì)污染,，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng),。

選擇我們的昆蟲(chóng)RNA純化試劑盒（過(guò)柱法），就是選擇精準(zhǔn),、高效,、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！