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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

DNA 只存在于細(xì)胞核內(nèi)，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和 DNA 復(fù)制的蛋白質(zhì)主要存在于細(xì)胞核中,。要研究蛋白質(zhì)與 DNA 的相互作用,，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細(xì)胞核蛋白質(zhì)。目前、細(xì)胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣,，一次處理大量樣品時(shí)尤其不便,，為此本公司基于溶脹法原理開發(fā)了本產(chǎn)品，用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞核蛋白的溫和微量提取,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.提取制備過程簡(jiǎn)便,，只需要一小時(shí)。

2.實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好,，尤其適合同時(shí)處理多個(gè)樣品,。

3.可用于培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，也可以用于新鮮組織細(xì)胞,。

4.提取步驟溫和,，制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉(zhuǎn)錄因子活性分析,、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(gel shift assay),、免疫共沉淀、Western Blotting,、 DNA 足跡圖實(shí)驗(yàn),、甲基化干擾實(shí)驗(yàn)和酶活性測(cè)定等研究。

5.1E6 個(gè)細(xì)胞中可以得到 50-70 μg 的核蛋白質(zhì),。

6.只適用于哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞,，不適用于植物和真菌等生物。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次細(xì)胞核微量純化實(shí)驗(yàn),。

8.細(xì)胞核-細(xì)胞漿蛋白提取試劑盒（溶脹法）只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

名稱規(guī)格包裝

動(dòng)物細(xì)胞溶脹液50 mL60 mL 本色瓶

動(dòng)物細(xì)胞核溶脹液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，4℃保存,，有效期一年,。

自備試劑

PMSF、DTT,、PBS,、胰-酶溶液等

使用方法：

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：取適當(dāng)量（根據(jù)樣品數(shù)量確定）的動(dòng)物細(xì)胞溶脹液和動(dòng)物細(xì)胞核溶脹液到新的塑料瓶中，置于冰上預(yù)冷,，并在使用前數(shù)分鐘內(nèi)同時(shí)向動(dòng)物細(xì)胞溶脹液和動(dòng)物細(xì)胞核溶脹液中加入自備的 PMSF 和 DTT,，使 PMSF 的最終濃度為

0.2 mM，DTT 的最終濃度為 1 mM,。實(shí)驗(yàn)中所用試劑均需先預(yù)冷,。一、提取培養(yǎng)細(xì)胞和懸浮細(xì)胞細(xì)胞核：

1.  培養(yǎng)細(xì)胞：將覆蓋率為 55-65%的培養(yǎng)細(xì)胞用自備的胰-酶溶液按標(biāo)準(zhǔn)的胰-酶法處理,，然后刮到 1.5 mL 塑料離心管中,，4℃ 600 g 離心 3 分鐘,，小心

棄上清。細(xì)胞數(shù)量最好在 5E5-7 個(gè),。細(xì)胞沉淀體積約 0.1 mL,。

2.懸浮細(xì)胞：直接將 5E5-7 個(gè)懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中，4℃

600 g 離心 3 分鐘,，小心棄上清,。細(xì)胞沉淀體積約 0.1 mL。

3.用 1 mL 自備的預(yù)冷的 PBS 緩沖液重懸細(xì)胞沉淀,，然后 4℃ 600 g 離心 3 分鐘,，小心棄上清,。注意：必須盡快用 PBS 緩沖液洗滌細(xì)胞沉淀,，否則沉淀細(xì)胞產(chǎn)生的 CO2 將使局部 pH 減低產(chǎn)生毒性。

4.在細(xì)胞沉淀中加入 1 mL 預(yù)加了 PMSF 和 DTT 的動(dòng)物細(xì)胞溶脹液,，用手指輕柔彈管壁使細(xì)胞沉淀懸浮起來,。最好不要用槍頭。

5.冰浴 10 分鐘,。如果有條件可以取少量樣品涂片,，在顯微鏡下觀察，90%的細(xì)胞將呈現(xiàn)氣球狀,。如果沒有則繼續(xù)冰浴直到\90%的細(xì)胞呈現(xiàn)氣球狀,。

6.渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。如果有 Dounce 玻璃勻漿器,，也可以用預(yù)冷的勻漿器勻漿 10-12 次,。如果有條件可以取少量樣品涂片，在顯微鏡下觀察,，90%的細(xì)胞將破裂,。如果未破裂細(xì)胞折光度高，并且沒有膨脹,，則表示這些細(xì)胞已經(jīng)死亡,。如果這樣的細(xì)胞太多，則需要重新取樣,。

7.4℃ 1000 g 離心 3 分鐘,，小心棄上清。沉淀為細(xì)胞核,，上清為胞漿成分,， 如果需要可以留存上清。

8.在細(xì)胞核沉淀中加入 100 μL 預(yù)加了 PMSF 和 DTT 的,、預(yù)冷的動(dòng)物細(xì)胞核溶脹液,，輕彈離心管混勻,，使沉淀懸浮起來。

9.冰浴 20 分鐘,。

10.4℃  1000 g 離心 2 分鐘,，小心收集上清液（細(xì)胞核提取物），可立即用于后續(xù)的凝膠滯后實(shí)驗(yàn),、BCA 法蛋白濃度測(cè)定,、活性檢測(cè)、SDS-PAGE 電泳,、2D 電泳等實(shí)驗(yàn),，也可以分裝后放-70℃長(zhǎng)期保存。

說明：本方法可以從 1E6 個(gè)細(xì)胞中得到 50-70 μg 的核蛋白質(zhì),。二,、對(duì)新鮮組織：

11.將 100-150 mg 新鮮組織置于培養(yǎng)皿中，用手術(shù)-剪將組織盡可能切成非常細(xì)小的碎片,，盡量去除脂肪組織和結(jié)締組織等非目的組織,，用自備的 PBS 緩沖液洗滌 2 次，離心后去上清,。在組織沉淀中加入 400 μL 預(yù)加了 PMSF 和 DTT 的動(dòng)物細(xì)胞溶脹液,，在預(yù)冷的玻璃勻漿器內(nèi)充分勻漿。勻漿需在冰浴或 4oC 進(jìn)行,。

12.勻漿后把勻漿液轉(zhuǎn)移到塑料離心管內(nèi),，用手指彈管壁使沉淀懸浮起來，冰浴放置 10-20 分鐘,，渦旋激烈震蕩 10 秒混勻,。

13.接下來按照步驟 7-10 操作，即得到新鮮組織細(xì)胞核蛋白提取物,。

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