目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>試劑盒>> 單細(xì)胞 RT-PCR 試劑盒
參考價(jià) | ¥ 2500 |
訂貨量 | ≥1盒 |
¥2500 |
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更新時(shí)間:2025-04-27 10:37:53瀏覽次數(shù):41評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 200次 |
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貨號(hào) | XY-D-1825 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱(chēng) | Single Cell RT-PCR Kit |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
單細(xì)胞是非常重要的實(shí)驗(yàn)材料,,但是由于單細(xì)胞中的 RNA 很少,,一個(gè)人體細(xì)胞只有 6 pg 的基因組 DNA,,一個(gè)小鼠胚胎干細(xì)胞只有 2 萬(wàn)多個(gè)mRNA 分子,一個(gè)小鼠成纖維細(xì)胞只有 50 萬(wàn)個(gè) mRNA 分子,。因此單個(gè)細(xì)胞根本沒(méi)法用來(lái)進(jìn)行核酸純化,。為了克服次缺點(diǎn),本公司開(kāi)發(fā)了單細(xì)胞RT-PCR 試劑盒,。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.直接用 1-500 個(gè)細(xì)胞進(jìn)行 RT-PCR,,免去 RNA 純化過(guò)程中不可避免的
RNA 丟失。
2.本產(chǎn)品采用 RT 和 PCR 分離的兩步法設(shè)置,方便用戶(hù)用珍貴的 cDNA
樣本進(jìn)行更多靶基因的PCR 檢測(cè),。
3.所含 RNA 保護(hù)劑可有效抑制 RNA 的降解,。
4.所含保護(hù)劑能有效克服痕量 RNA 因非特異性吸附產(chǎn)品的丟失。
5.RT 所得的 cDNA 可以用戶(hù)后續(xù)染料法PCR 和探針?lè)?PCR 檢測(cè),。本產(chǎn)品只包括染料法PCR 試劑,。
6.本產(chǎn)品足夠進(jìn)行 200 次 5 μL 體系的單細(xì)胞裂解、200 次 10 μL 體系的逆轉(zhuǎn)錄,、200 次 10 μL 體系的染料法 qPCR 實(shí)驗(yàn),。
7.單細(xì)胞 RT-PCR 試劑盒只能用于科研。
產(chǎn)品參數(shù):
成份規(guī)格包裝
單細(xì)胞裂解液(RNA 專(zhuān)用)1 mL1.5 mL 白蓋管
5×單細(xì)胞 RT Buffer A400 μL0.5 mL 藍(lán)蓋管
5×單細(xì)胞 RT Buffer B400 μL0.5 mL 綠蓋管
單細(xì)胞專(zhuān)用 MMLV100 μL0.5 mL 紅蓋管
2×染料法 qPCR MasterMix1 mL1.5 mL 本色蓋
使用手冊(cè)1 份無(wú)
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,,-20℃保存,,有效期一年。
自備試劑
制備單細(xì)胞所需試劑,,靶基因?qū)R坏?PCR 引物(不能擴(kuò)增基因組 DNA)
使用方法:
1.用戶(hù)需要根據(jù)樣本細(xì)胞種類(lèi)選用合適的方法(如胰-酶消化)制備單細(xì)胞懸液,,對(duì)已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞(如卵細(xì)胞),則可以跳過(guò)此步,。本試劑盒不含相關(guān)試劑,。
2.將 5μL 單細(xì)胞裂解液(RNA 專(zhuān)用)預(yù)先分裝到 0.2 mL PCR 管中或 96孔板中,分裝的管數(shù)根據(jù)樣品數(shù)決定,。
3.用流式細(xì)胞儀或在倒置顯微鏡下用液壓顯微操作器將 1-500 個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到上步所得的、預(yù)裝了裂解液的PCR 管或 96 孔板中,。
4.細(xì)胞進(jìn)入裂解液后,,裂解即發(fā)生。細(xì)胞裂解后在常溫最多只能放 5 小時(shí),。如果不需要立即使用,,必須將樣品放-80℃長(zhǎng)期保存。細(xì)胞裂解液可以 反復(fù)凍融最多 5 次,。
5.如果立即使用,,則在裂解樣品中加入 2 μL 5×單細(xì)胞 RT Buffer A。
6.65℃保溫 5 分鐘后立即放冰上,。
7.加入 2 μL 5×單細(xì)胞 RT Buffer B,。
8.加入 1 μL 單細(xì)胞專(zhuān)用MMLV,輕柔吹打混勻,,總體積為 10 μL,。
9.在 PCR 儀上按下列參數(shù)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng):25℃保溫 5 分鐘,50℃保溫
60 分鐘,,55℃保溫 15 分鐘,,70℃保溫 15 分鐘。
10.所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)PCR,,也可以放-20℃長(zhǎng)期保存,。
11.加入 50 μL 自備超純水到 10 μL cDNA 中稀釋 cDNA,。
12.取 3 μL 上步所得 cDNA 稀釋液作為 PCR 模板,加入濃度為 4 μM 的自備PCR 引物各 1μL,,加入 5 μL 2×染料法 PCR Mix,,總體積為 10 μ L。
13.根據(jù)選定的 PCR 程序進(jìn)行染料法 qPCR 并進(jìn)行溶解曲線(xiàn)分析,。
14.如果用戶(hù)需要用 cDNA 進(jìn)行探針?lè)≒CR 檢測(cè),,需要自備相關(guān)試劑。
選擇我們的單細(xì)胞 RT-PCR 試劑盒,,就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測(cè)方案,,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,!
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