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產(chǎn)品簡介：

單細胞是非常重要的實驗材料,，但是由于單細胞中的 RNA 很少,，一個人體細胞只有 6 pg 的基因組 DNA，一個小鼠胚胎干細胞只有 2 萬多個mRNA 分子,，一個小鼠成纖維細胞只有 50 萬個 mRNA 分子,。因此單個細胞根本沒法用來進行核酸純化。為了克服次缺點,，本公司開發(fā)了單細胞逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,。

產(chǎn)品特點：

1.直接用 1-500 個細胞進行逆轉(zhuǎn)錄，免去 RNA 純化過程中不可避免的

RNA 丟失,。

2.得到的 cDNA 可以用于 RT 和 PCR 分離的兩步法 RT-PCR,，方便用戶用珍貴的 cDNA 進行更多靶基因的后續(xù)染料法或探針法 qPCR 檢測。

3.所含 RNA 保護劑可有效抑制 RNA 的降解,。

4.所含保護劑能有效克服痕量 RNA 因非特異性吸附產(chǎn)品的丟失,。

5.本產(chǎn)品足夠進行 200 次 5 ?L 體系的單細胞裂解和 200 次 10 ?L 體系的逆轉(zhuǎn)錄。

6.本產(chǎn)品只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

單細胞裂解液（RNA 專用）1 mL1.5 mL 本色蓋

5×單細胞 RT Buffer A400 ?L0.5 mL 白蓋管

5×單細胞 RT Buffer B400 ?L0.5 mL 綠蓋管

單細胞專用 MMLV100 ?L0.5 mL 紅蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸,，-20℃保存，有效期一年,。

自備試劑

制備單細胞所需試劑

使用方法：

1.用戶需要根據(jù)樣本細胞種類選用合適的方法（如胰-酶消化）制備單細胞懸液,，對已經(jīng)處于單細胞懸浮狀態(tài)的細胞（如卵細胞），則可以跳過此步,。本試劑盒不含相關(guān)試劑,。

2.將 5.5 ?L 單細胞裂解液（RNA 專用）預先分裝到 0.2 mL PCR 管中或

96 孔板中，分裝的管數(shù)根據(jù)樣品數(shù)決定,。

3.用流式細胞儀或在倒置顯微鏡下用液壓顯微操作器將 1-500 個細胞轉(zhuǎn)移到上步所得的,、預裝了裂解液的PCR 管或 96 孔板中,。

4.細胞進入裂解液后，裂解即發(fā)生,。細胞裂解后在常溫最多只能放 5 小時,。如果不需要立即使用，必須將樣品放-80℃長期保存,。細胞裂解液可以 反復凍融最多 5 次,。

5.如果立即使用，則在裂解樣品中加入 2 ?L 5×單細胞 RT Buffer A,。

6.65℃保溫 5 分鐘后立即放冰上,。

7.加入 2 ?L 5×單細胞 RT Buffer B。

8.加入 0.5 ?L 單細胞專用 MMLV,，輕柔吹打混勻,，總體系為 10 ?L。

9.在 PCR 儀上按下列參數(shù)進行逆轉(zhuǎn)錄反應：25℃保溫 5 分鐘,，50℃保溫

60 分鐘,，55℃保溫 15 分鐘，70℃保溫 15 分鐘,。

10.所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)PCR,，也可以放-20℃長期保存。后續(xù)染料法 qPCR：本產(chǎn)品不含相關(guān)試劑,，操作過程僅供參考,。

11.加入 50 ?L 自備超純水到 10 ?L cDNA 中稀釋 cDNA。

12.取 3 ?L 上步所得 cDNA 稀釋液作為 PCR 模板,，加入濃度為 4 ?M 的自備 PCR 引物各 1?L,，加入 5?L 2×染料法PCR Mix，總體積為 10 ?L,。

13.根據(jù)選定的 PCR 程序進行染料法 qPCR 并進行溶解曲線分析,。

選擇我們的單細胞逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，就是選擇精準,、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航,！