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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

現(xiàn)在最-常用的質(zhì)粒純化試劑盒幾乎都是基于堿變性原理，必須使用三種溶液進(jìn)行處理,，一般需要30分鐘左右,。本產(chǎn)品采用新型技術(shù)，只需要一種溶液處理即可以完成細(xì)菌裂解,，并且裂解物可以直接上柱純化質(zhì)粒DNA,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.一步式，提取一個(gè)樣品只需10分鐘左右,，比傳統(tǒng)的堿變性方法快捷,。

2.質(zhì)粒DNA產(chǎn)量跟經(jīng)典堿變性法相當(dāng)，一般1-5mL可以得到3-15ug（對(duì)低拷貝質(zhì)粒）和5-35ug（對(duì)高拷貝質(zhì)粒）,。

3.適用于高拷貝,、中拷貝和低拷貝質(zhì)粒的提取。

4.適用于各種大腸桿菌宿主菌,。

5.所得質(zhì)粒DNA呈超螺旋結(jié)構(gòu)的比例比堿變性法更高。

6.基因組DNA污染少,。

7.由于操作太快,，溶液中的RNase來(lái)不及降解RNA，一般會(huì)有少量RNA污染,，但不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),。

8.可以直接用于電泳、酶切,、PCR,、細(xì)菌轉(zhuǎn)化、分子克隆,、測(cè)序等實(shí)驗(yàn),。

9.超快質(zhì)粒DNA純化試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝材料

超快質(zhì)粒DNA純化溶液A30 mL30ml棕色玻璃瓶

離心吸附柱50套塑料袋

專用洗柱液50 mL30mL本色瓶

DNA洗脫液（基因組純化用）10 mL10mL本色瓶

使用手冊(cè)1份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸及保存,，超快質(zhì)粒DNA純化溶液A長(zhǎng)期保存需要放4℃,，有效期一年。

自備試劑

無(wú)

使用方法：

1.用塑料離心管收集0.5-5 mL過(guò)夜培養(yǎng)的飽和新鮮菌液,，室溫14000g離心半分鐘,，棄上清（培養(yǎng)基）,。注意: 可以使用-20℃凍存的細(xì)菌沉淀和4℃放置過(guò)夜的細(xì)菌培養(yǎng)液，但后者的質(zhì)?；厥招瘦^低,。

2.在細(xì)菌沉淀中加入0.6mL超快質(zhì)粒DNA純化溶液A，充分吹打或振蕩裂解細(xì)菌直到裂解變澄清,，一般需要半分鐘左右,。注:此方法不同于堿裂解法，此步需要充分吹打,，使基因組DNA斷裂,。

3.將裂解液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，直接離心,。如果靜置3-5分鐘充分裂解細(xì)菌后再離心,，則質(zhì)粒回收率將提高10%左右,。

4.室溫14000 rpm離心1分鐘,，棄穿透液。一般菌液越多裂解液越稠,，需要離心的時(shí)間就越長(zhǎng),，所以不建議使用超過(guò)5mL的起始菌液。如果離心1分鐘后還有少量液體在離心柱中殘留,，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間直到所有液體成功過(guò)柱,。有的離心機(jī)標(biāo)注的離心速度跟實(shí)際的速度不符合，這種情況下,，可以使用離心機(jī)的最大離心速度離心,。

5.在離心吸附柱中加入0.7 mL的專用洗柱液，室溫14000rpm離心半分鐘,，棄穿透液,。

6.如果需要，可以再在離心吸附柱中加入0.3 mL的專用洗柱液,，室溫14000rpm離心半分鐘,，棄穿透液。此步可以降低RNA污染,，但由于RNA污染并不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn),，為了快捷，一般可以跳過(guò)此步,。

7.室溫14000rpm離心半分鐘,，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留洗柱液會(huì)影響后續(xù)的電泳上樣（DNA沉不到加樣孔里去）和酶反應(yīng),。

8.將離心柱置于一個(gè)自備的1.5 mL塑料離心管中,，加入50 uL DNA洗脫液（基因組DNA專用）。

9.室溫14000 g離心半分鐘,，離心管底溶液即質(zhì)粒DNA,，可以直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)（濃度測(cè)定、酶切,、電泳和測(cè)序）或放冰箱長(zhǎng)期保存,。 一般1-5mL菌液可以得到3-15ug（對(duì)低拷貝質(zhì)粒）或5-35ug（對(duì)高拷貝質(zhì)粒）質(zhì)粒DNA。

10.本方法得到的質(zhì)粒DNA一般足夠各種后續(xù)實(shí)驗(yàn),。如果需要進(jìn)一步提高質(zhì)粒DNA產(chǎn)量,，可以再加30-50uL DNA洗脫液2.0到離心吸附柱中再次洗脫，可以得到相當(dāng)于第一次洗脫量10-20%的質(zhì)粒DNA,。也可以將第一次洗脫得到的質(zhì)粒DNA溶液再加到離心吸附柱中洗脫,，可以使質(zhì)粒DNA產(chǎn)量提高10-20%。

注意：本方法提取的質(zhì)粒DNA有如下特點(diǎn)：

1,、因?yàn)闆](méi)有使用劇烈的堿變性步驟,，所以質(zhì)粒呈現(xiàn)天然的超螺旋結(jié)構(gòu)的比例較大。

2,、由于整個(gè)操作非?？焖伲譀](méi)有使用堿來(lái)降解RNA,，所以試劑中的RNase都來(lái)不及把細(xì)菌的內(nèi)源RNA徹-底降解,，故所得質(zhì)粒比堿變性法提取的質(zhì)粒有更多的RNA污染，因此不建議使用測(cè)OD的方法確定質(zhì)粒DNA的濃度,，故最好采用電泳比較法,，即通過(guò)比較質(zhì)粒DNA跟濃度已知的DNA marker的相對(duì)亮度來(lái)確定質(zhì)粒的濃度。注意：RNA污染一般不影響電泳,、酶切和測(cè)序。

3,、如果需要徹-底去除RNA污染,，則需要在每次加入專用洗柱液后，室溫放置2-5分鐘,，讓其含有的RNase充分降解結(jié)合在膜上的RNA,，離心時(shí)降解成小片段的RNA就穿透到收集管，結(jié)合在膜上的DNA就更純凈,。

選擇我們的超快質(zhì)粒DNA純化試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！