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產(chǎn)品簡介：

石蠟包埋切片 DNA 樣本,、血液游離 DNA 樣本,、法醫(yī) DNA 樣本和考古 DNA 樣本都是非常重要的實驗材料,，但是這些材料的 DNA 不但含量稀少，而且往往都高度降解,，使用前都需要先進(jìn)行擴(kuò)增,。目前進(jìn)行擴(kuò)增的方法很多，包括 PEP-PCR,、DOP-PCR,、MDA、SCOMP,，balanced-PCR 等,，但各有缺點，不盡人意,。為此,，本公司結(jié)合 DNA 環(huán)化技術(shù)和 RCA 滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù),，對痕量 DNA 進(jìn)行擴(kuò)增。其原理示意圖如下：

產(chǎn)品特點：

1.即開即用,，十分簡單方便,，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.直接使用純化的線狀 dsDNA 為模板,。本產(chǎn)品不包括純化試劑盒,。如果 DNA 是古舊的有損傷的 DNA，需要使用另外的試劑盒（痕量古舊 DNA 修復(fù)及擴(kuò)增試劑盒）,。

3.最-低可以使用 5pg 的模板 DNA（一個人體細(xì)胞的 DNA 為 6pg）,，最后可以擴(kuò)增上 1 千-1 萬倍（起始模板DNA 越少，擴(kuò)增倍數(shù)越高）,。

4.優(yōu)化的反應(yīng)體系,，所有反應(yīng)一管式完成，避免了珍貴痕量樣本的丟失,。

5.使用高保真的phi29 DNA 聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增,，避免了在擴(kuò)增過程中引入新突變。

6.擴(kuò)增試劑含熒光染料,，可以實時監(jiān)測擴(kuò)增反應(yīng)過程,，不需要跑電泳檢測，節(jié)約寶貴的擴(kuò)增后樣品,。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次 20uL 體系的環(huán)化-擴(kuò)增反應(yīng),。

8.得到的 DNA 可以直接用于二代測序、酶切或qPCR 等后續(xù)實驗,。

9.痕量 DNA 滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液100 uL0.5mL 白蓋管

DNA 環(huán)化酶 A25 uL0.5mL 紅蓋管

DNA 環(huán)化酶B25 uL0.5mL 紅蓋管

RCA 專用隨機(jī)引物溶解液10 uL0.5mL 綠蓋管

RCA 專用隨機(jī)引物干粉50 次0.5mL 本色管

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL50 uL0.5mL 紅蓋管

超純水1mL1mL1.5mL 藍(lán)蓋管

使用手冊1 份無

運輸及保存

低溫運輸,，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

樣本 DNA 純化試劑盒,、DNA 片段回收試劑盒（從 RCA 反應(yīng)體系中回收擴(kuò)增產(chǎn)物）

使用方法：

一,、DNA 環(huán)化

1.首-次使用本試劑盒時，需要在 RCA 專用隨機(jī)引物溶解液化凍后,，將 110uL 全部加入到 RCA 專用隨機(jī)引物干粉管中,，渦旋震蕩半分鐘溶解，短暫離心,，得 RCA 專用隨機(jī)引物,。放冰上待用。沒用完的需要放-20℃長期保存,。

2.按下表在 200uL 的PCR 管中設(shè)置和進(jìn)行 DNA 環(huán)化-擴(kuò)增反應(yīng)：

成分管 1（樣本）管 2

（無模板對照）

自備模板 DNA（5pg-100ng）1-8.5 uL不加

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液1 uL1 uL

超純水加到 9.5 uL加到 9.5 uL

DNA 環(huán)化酶 A0.5 uL0.5 uL

合計10 uL10 uL

在 PCR 儀器上 37℃ 2 小時,，65℃ 20 分鐘滅活酶

超純水4.0 uL4.0 uL

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液0.5 uL0.5 uL

DNA 環(huán)化酶 B0.5 uL0.5 uL

合計15 uL15 uL

室溫放置 2 小時,，65℃ 10 分鐘滅活酶

超純水1.5 uL1.5 uL

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液0.5 uL0.5 uL

RCA 專用隨機(jī)引物溶液2 uL2 uL

合計19 uL19 uL

放在PCR 儀器上，設(shè)置 95℃加熱 5 小時,，自然冷卻到室溫,。

再加入下列成分

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL1 uL1 uL

混勻后放熒光定量PCR 儀器上,，設(shè)置 30℃保溫 16 小時,，每 10 分鐘

設(shè)置成一個循環(huán)，每個循環(huán)采集一次 SYBR 通道的熒光信號,。

二,、數(shù)據(jù)分析

3.由于是可以實時檢測RCA 擴(kuò)增反應(yīng)，所以RCA 擴(kuò)增反應(yīng)不一定進(jìn)行 16 小時,， 可以在擴(kuò)增熒光信號的曲線進(jìn)入平臺期（已經(jīng)沒有新的 DNA 合成）后結(jié)束,。因為 phi29 DNA 聚合酶有很強(qiáng)的 3-5 外切酶活性，在擴(kuò)增反應(yīng)耗盡 dNTP 后,，它可能會進(jìn)入酶切模式,，逐漸降解已經(jīng)合成的 DNA。

4.65℃保溫 10 分鐘滅活酶,。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強(qiáng)的 3-5 外切酶活性,， 因此必須滅活，否則它將逐漸降解反應(yīng)管中已經(jīng)合成的 DNA,。

5.典型實驗結(jié)果,。有擴(kuò)增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無模板對照將沒有此擴(kuò)增曲線（見下圖）：

6.如果沒有熒光定量 PCR 儀器,，則只能電泳檢測或PCR 檢測是否有擴(kuò)增,。

7.擴(kuò)增所得 DNA 可以用于后續(xù)實驗，如 qPCR 擴(kuò)增,。如果后續(xù)實驗需要純化去除dNTP（如通過測 OD 確定濃度）或去除 RCA 專用隨機(jī)引物,，則需要自備試劑盒進(jìn)行純化處理。

選擇我們的痕量 DNA 滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護(hù)航,！