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產(chǎn)品簡介：

包涵體是指細菌表達的蛋白在細胞內(nèi)凝集,，形成無活性的固體顆粒,。一般含有 50% 以上的重組蛋白，其余為核糖體成份,、質(zhì)粒 DNA,、脂多糖等，大小為 0.5-1 ?m,，難溶于水,，只溶于變性劑如尿素、鹽酸胍等,。包涵體可以避免蛋白酶對表達蛋白的降解,，其形成降低了胞內(nèi)表達蛋白的濃度，故有利于表達量的提高,。通過E.coli宿主表達得到的重組蛋    白往往會形成包涵體,，其中的重組蛋白質(zhì)只完成部分折疊，還沒形成最后的正確空間結(jié)構(gòu),，   所以沒有生物活性,，要得到有活性的重組蛋白，還需要后續(xù)的溶解和復性（重折疊）處理,。目前最-常用的溶解包涵體的方法是用尿素,，Sarkosyl,，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋白質(zhì)被徹-底變性,，使后續(xù)的蛋白質(zhì)復性處理效率降低,。本公司基于包涵體中的重組蛋白質(zhì)已經(jīng)完成了部分折疊的事實，開發(fā)了此款溫和溶解-復性試劑盒,，它跟常規(guī)方法比較如下：

產(chǎn)品特點：

1.一站式,，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質(zhì)復性的所有試劑,。

2.采用溫和法溶解包涵體,，釋放出其中沒有徹-底變性的蛋白質(zhì)。

3.提供 10 種不同的溶解液,，用戶需要進行小量篩選,，從中篩選出最-適合自己蛋白材料的一種。用戶可以另購選中的任何一種進行大規(guī)模操作,。

4.所用復性液基于稀釋復性,，經(jīng)過精心優(yōu)化，有利于大部分蛋白的復性,。

5.本試劑盒足夠 100 次,。

6.包涵體蛋白溶解及復性試劑盒只可用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

包涵體洗滌液250 mL250 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 110 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 210 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 310 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 410 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 510 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 6 10 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 710 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 810 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 910 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白溶解液 101010 mL10 mL 本色瓶

包涵體蛋白質(zhì)復性液250 mL250 mL 本色瓶

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

常溫運輸和保存,，有效期一年,。

自備試劑

去離子水、BCA 蛋白濃度測定試劑盒,、0.22 ?m 注射器式濾膜,。

使用方法：

一、包涵體的洗滌（用常規(guī)方法得到的包涵體常含有去污劑和細胞碎片,，因此需要經(jīng)過   充分的洗滌才能用于本實驗,。）

1.將 10 mg 包涵體沉淀溶解在 5 mL 包涵體洗滌液中，超聲波處理 8 次或充分吹打混勻得到包涵體懸液,?？梢赃m當預留此步所得 30 ?L 包涵體懸液作為 SDS-PAGE 電泳對照。其余的在 4℃ 12000 rpm 離心 20 分鐘,，棄上清留包涵體沉淀,。

2.重復上面的洗滌步驟 3 次，每次預留 30 ?L 包涵體懸液作為電泳對照,。

3.將包涵體沉淀溶解在 1 mL 包涵體洗滌液中,，超聲波處理 8 次或充分吹打混勻再得包涵體懸液。

4.檢查包涵體的純度：將上步所得到的包涵體懸液和前幾步得到的包涵體懸液一起用于SDS-PAGE 電泳,，檢查每次洗滌去除雜帶的情況,。

5.檢查包涵體的濃度：用自備的 BCA 蛋白檢測試劑盒測試第 4 步得到的包涵體懸液的蛋白質(zhì)濃度。

6.將第4 步得到的包涵體懸液的蛋白質(zhì)濃度調(diào)到5-10 mg/mL(如果測得值低于此范圍,，

則重復本實驗,，只是離心后用更少量的洗滌液溶解；如果測得值高于此范圍,，則用適量洗滌液稀釋),，然后將包涵體懸液均分到 10 個 1.5 mL 塑料離心管中，每管 100 ?L,。

7.4℃ 12000 rpm 離心 20 分鐘后棄上清,。所得沉淀即純化的、待用的包涵體,。

二,、溶解包涵體的優(yōu)良溶解液的確定

8.標記上步所得到的 10 個離心管，并分別加入 10 種包涵體溫和溶解液,，每種 1 mL,。注意：準確記錄離心管編號和加入溶解液編號的對應關(guān)系。

9.充分振蕩后,，室溫放置 30 分鐘,。

10.450 nm 檢測渾濁度并記錄下數(shù)據(jù)。

11.4℃ 12000 rpm 離心 10 分鐘后收集上清,，此溶液含有溶解的或部分溶解的包涵體蛋白質(zhì),。

12.用 0.22 ?m 注射器式濾膜過濾上步所得溶液。280 nm 檢測其光吸收,。

13.溶解液溶解包涵體蛋白的能力跟包涵體溶液濁度跟成反比,，跟溶解液 OD280 光吸收成正比。根據(jù)上面的數(shù)據(jù)即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體具有優(yōu)良溶解能力

（OD 值最高者有最大溶解包涵體蛋白的能力）,，并將選用此溶解液用于下面的復性實驗,。本試劑盒提供的 10 種包涵體溶解液均可以另購。

三．包涵體蛋白的復性

14.在 2.5 mL 4℃預冷的,、處于輕柔攪拌中的包涵體蛋白質(zhì)復性液（本試劑盒提供）中,， 逐滴加入上步得到的 OD280 數(shù)值最高的包涵體溶解液。

15.待所有包涵體溶解液都加完后,，將包涵體蛋白復性混合液用孔徑為 0.22 ?m 注射器式濾膜過濾,，除去包涵體（直徑一般在 0.5-0.8 ?m）和大的聚合物。

16.將得到的復性蛋白溶液（過濾穿透液）直接用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩

層析等實驗,，不需要透析和脫鹽,。

選擇我們的包涵體蛋白溶解及復性試劑盒，就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航！