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產(chǎn)品簡介：

核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進(jìn)行雜交，由此檢測印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子（靶分子）,。核酸雜交是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一,，應(yīng)用非常廣泛。由于核酸雜交效率受印跡膜種類,、雜交溫度探針濃度,、雜交液離子強(qiáng)度、雜交液 pH 及雜交液粘度等因素影響,，用戶自己摸索和優(yōu)化相關(guān)條件非常繁瑣,，因此本公司開發(fā)了不含甲酰胺的高效核酸雜交液。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.既可用于 Southern 雜交（靶分子為 DNA）,，也可用于和 Northern 雜交（靶分子為 RNA）,，還可以用于菌落雜交，基因芯片等雜交,。

2.既可以用于同位素探針的雜交,，也可以用于非同位素探針的雜交。

3.既可以使用 DNA（包括 DNA Oligo）探針,，也可以使用 RNA 探針（包括 RNA Oligo）,。

4.含多種能夠促進(jìn)雜交的聚合物，使雜交反應(yīng)能在 6~12 小時完成,，而常規(guī)雜交反應(yīng)一般需要 12~24 小時,。

5.含多種封堵劑，能阻印跡膜對探針分子的非特異性吸附,，能有效降低背景信  號,，延長曝光時間以便檢測到低拷貝的 RNA（Northern）和單拷貝的基因

（Southern）。

6.跟各種常用的印跡膜兼容，包括硝酸纖維素膜和尼龍膜,。

7.高效核酸雜交液（不含甲酰胺）只可用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

高效核酸雜交液（不含甲酰胺）

100 mL125 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，有效期一年,。本產(chǎn)品屬于高鹽溶液，低溫下產(chǎn)生沉淀,， 必須在 65℃加熱溶解并充分搖勻后才能使用,。

自備試劑

印跡膜、標(biāo)記探針,、6×SSC,、2×SSC、0.1×SSC

使用方法：

一,、根據(jù)探針和靶分子的不同,，分別按下面不同情況計算雜交分子的 Tm 值1.  對 DNA-DNA 雜交，其 Tm=81.5+16.6×log10[Na+]+0.41×GC%–

500/L

說明：L 是探針或靶分子的長度（用兩者中最短的一個）

GC%是探針或靶分子中的 GC 百分比（用兩者中最短的一個）

Na+濃度是本產(chǎn)品中 Na+的濃度,，為 0.75M,，16.6×log10[Na+]=（-2.07）

2.對 DNA-RNA 雜交，其 Tm 值比 DNA-DNA 的 Tm 值要高 10-15℃,。

3.對 RNA-RNA 雜交,，其 Tm 值比 DNA-DNA 的 Tm 值要高 20-25℃。

4.對 Oligo 探針雜交,，Tm=GC 數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃,。二、確定最佳雜交溫度（預(yù)雜交溫度跟雜交溫度應(yīng)該一樣）

5.對于大于 200bp 的DNA-DNA 雜交,，最佳雜交溫度一般比 Tm 低 15-25℃,，

一般選擇 68℃。

6.對 RNA-RNA 或 DNA-RNA 雜交,，最佳雜交溫度一般比 Tm 低 15-25℃,。如果這樣計算出的雜交溫度很高（如高于 70℃），則 RNA 容易降解,。

7.對 Oligo 探針的雜交,，最佳雜交溫度一般比 Tm 低 5℃。由于 Oligo 較短,，更容易受各種因素影響（如錯配率,、修飾堿基比例等），所以最佳溫度需要  適度摸索和優(yōu)化,。

三,、確定洗膜溫度

8.一般使用 0.1×SSC 做洗膜液，在此條件下的最佳洗膜溫度比 Tm 低

5-12℃，一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜,。Oligo 探針可以室溫洗膜,。四,、預(yù)雜交步驟

9.預(yù)雜交就是用不含探針的本產(chǎn)品跟印跡膜進(jìn)行孵育,，其目的是用所含的非特

異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉，否則這些位點(diǎn)會吸附標(biāo)記的探針,，  造成高背景,。

10.將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的6×SSC溶液中，使其充分濕潤,。

11.將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中（塑料袋最好預(yù)先封口,，再剪掉一角，  留一個小口）,，按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 高效核酸雜交液的比例沿小口加入高效核酸雜交液,，然后用塑料封口機(jī)將口封牢。

12.將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在最佳雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,，保溫 1-2 小時,，延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停的搖動狀態(tài)中,，使高效核酸雜交液與印跡膜充分接觸,。

五、雜交步驟

13.如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,，則需經(jīng)變性處理,。具體操作是將探針樣品在沸  水浴中加熱 5 分鐘，然后迅速置冰浴中,。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,， 則不需變性，直接使用,。

14.將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中（先用剪刀剪一小口,，加入探針后用熱封機(jī)封口）。探針的加入量視探針標(biāo)記效率而定,， 一般要求終濃度不能低于 1-2ng/mL,。如果檢測基因組中的單拷貝基因，探針的加入量應(yīng)加大,，而對于檢測克隆的基因片段,，則探針的量可減少。如果是放射性探針,，應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,，以避免雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。

15.在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,，時間一般為 6-12 小時,。六、洗膜步驟

16.注意在下面的所有操作過程中,，一定不要使印跡膜干燥,。此步是將與印跡膜

非特異結(jié)合的探針分子洗去而只留下特異結(jié)合的探針分子。由于非特異性雜  交的雜交分子解鏈溫度較低,，熱穩(wěn)定性較差,，在一定的溫度和較低的離子強(qiáng)  度下，即可洗掉,。

17.雜交完畢,，取出塑料袋，剪去一角,，倒出所有的含探針的雜交液,。此含探針  的雜交液可以多次使用再倒棄。

18.剪開雜交袋,，用鑷子取出印跡膜,，浸沒于大量的 2×SSC（含 0.5%SDS）溶液中，室溫下振蕩漂洗 15 分鐘,。

19.重復(fù)上步操作一次,。

20.將印跡膜轉(zhuǎn)移至 0.1×SSC（含 0.1%SDS）溶液中，在計算好的洗膜溫度下振蕩漂洗 30 分鐘至 1 小時,。

21.重復(fù)上步操作一次,。如果是同位素標(biāo)記探針，則需要重復(fù)至用蓋革計數(shù)器在  無核酸區(qū)域檢測不出放射信號為止,。

22.將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上,，吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測。

選擇我們的高效核酸雜交液（不含甲酰胺）,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護(hù)航,！