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產(chǎn)品簡介：

用高密度介質(zhì)來分離動(dòng)物軟體組織的細(xì)胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau 于 1956 年發(fā)明,，其原理是細(xì)胞核的密度較大，在高速離心條件下可在高密度介質(zhì)（2.2mol/l 蔗糖溶液）中沉降下來,，從而達(dá)到與細(xì)胞質(zhì)其它成分分開的目的,。該方法能通過一步離心得到較高純度的細(xì)胞核,，得到廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品就是在 Chauveau 方法的基礎(chǔ)上優(yōu)化改進(jìn)而來,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.基于密度梯度分離，可有效去除細(xì)胞質(zhì)及其他細(xì)胞器,，得到的細(xì)胞核純凈,，

2.加進(jìn)氯化鈣,、氯化鎂、氯hua鉀等改變分離介質(zhì)滲透壓的物質(zhì),，減少了細(xì)胞核的脆性，增加了細(xì)胞核的完整性,。

3.精心調(diào)節(jié)了介質(zhì)的pH，防止細(xì)胞核在分離過程中的聚集,，還能保持細(xì)胞核的精細(xì)結(jié)構(gòu)

4.快速,，整個(gè)操作過程僅需 1 小時(shí)即可完成（對(duì)一個(gè)樣品而言）。

5.提供染色試劑,，可以在普通光學(xué)顯微鏡下檢測純化的細(xì)胞核的純度,。

6.處理溫和，得到的細(xì)胞核中的大部分蛋白質(zhì)都具有活性,，可以用于膠遲阻實(shí)驗(yàn),、酶活性分析細(xì)胞凋亡,、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究,；也可用于超大片段 DNA 的純化,。

7.不但適用于動(dòng)物和植物培養(yǎng)細(xì)胞,，還能用于實(shí)體組織（需要用 Dounce

或 Potter 勻漿器勻漿組織）。

8.一次微量提取足夠處理 0.1 克組織或 10E7 個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,，本產(chǎn)品足夠 50

次微量提取。

9.細(xì)胞核微量制備試劑盒（蔗糖梯度法）只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

細(xì)胞核純化溶液 A 成分一100 mL120 mL 本色瓶

細(xì)胞核純化溶液 A

成分二（干粉）約 20 g30 mL 本色瓶

細(xì)胞核純化溶液 B 成分一50 mL60 mL 本色瓶

細(xì)胞核純化溶液 B

成分二（干粉）約 100 g120 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存,，有效期一年,。

自備試劑

手動(dòng)或電動(dòng) Dounce 或Potter 組織勻漿器（研磨杵和套管的空隙最好為 0.1mm，如果小于細(xì)胞核的直徑,，則會(huì)使細(xì)胞核破裂）、水平式低溫高速離心機(jī),、光學(xué)顯微鏡,。

使用方法：

一,、準(zhǔn)備工作：先將細(xì)胞核純化溶液 A 的成分二（干粉）全部加入到細(xì)胞核純化溶液 A 成分一（溶液）中，搖晃溶解后得到 100 mL 細(xì)胞核純化溶液 A,。將細(xì)胞核純化溶液 B 的成分二（干粉）全部加入到細(xì)胞核純化溶液 B 成分一（溶液）中,，搖晃溶解后得到 50 mL 細(xì)胞核純化溶液 B。4℃ 放置不能超過 2 天,，長期放置需要放-20℃,。

二,、微量細(xì)胞核分離（放量提取各試劑的用量可以按比例放大）：

1.對(duì)組織細(xì)胞：稱取 100~200 mg 新鮮組織（如動(dòng)物肝臟、腦,、心肌和植物葉片等）,，用自備的 PBS 或生理鹽水洗凈血水,，濾紙吸干，用剪刀或刀片將其剪為碎塊（最好大小為 1cm3,，過小反而不利于勻漿）放入小容量Dounce 或Potter 玻璃勻漿器內(nèi)。

2.對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞：用自備胰-酶按標(biāo)準(zhǔn)方法消化培養(yǎng)細(xì)胞,，PBS 洗滌，800×g 5~10 分鐘離心收集細(xì)胞,，計(jì)數(shù)。每次微量提取需要 5×10E7 個(gè)細(xì)胞,， 加入 1.0 mL 預(yù)冷的細(xì)胞核純化溶液 A 重懸細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移到小容量Dounce 或Potter 玻璃勻漿器內(nèi),，

3.用 Dounce 或Potter 組織勻漿器在冰上破碎組織或細(xì)胞,。如果用手動(dòng)勻漿器，一般需要 20~30 次,。如果用電動(dòng)勻漿器，一般需要處理 3-5 次,， 每次 5～10 秒鐘（轉(zhuǎn)速為 500 r/min）。

4.將勻漿液轉(zhuǎn)移到離心管中,。如果勻漿液有可見的結(jié)締組織和未破碎的組織塊，可以用三層自備的紗布放在 1.5 mL 離心管管口，將勻漿液過濾進(jìn)入離心管,。

5.4℃，700-800×g 水平離心 5-10 分鐘,。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清,。

6.加入 0.5 mL 預(yù)冷細(xì)胞核純化溶液 A 重懸沉淀,。用預(yù)冷的勻漿器（用前需要將表面的組織洗去）重懸沉淀,。

7.在水平型離心管中加入 0.5mL 預(yù)冷的細(xì)胞核純化溶液 B，然后靠管壁慢慢加入上步得到的重懸液。

8.在 4℃ 23000g 離心 30 分鐘,，管底的沉淀即為細(xì)胞核,。

9.小心吸棄上清液,。注意：上清一般比較粘稠，最好倒立一段時(shí)間,。

10.用 0.5 mL 細(xì)胞核純化溶液 A 重懸沉淀。

11.在 4℃ 1500g 離心 5 分鐘,，吸棄上清，沉淀即為純凈的細(xì)胞核,。可以直接使用,，也可以加等體積的自備甘油，混勻后放液氮或-70℃保存,。

12.用本方法一般可以從 0.1g 肝臟組織中純化到 1-2×107 個(gè)細(xì)胞核。如果后續(xù)試驗(yàn)是Western Blot 和 2D-膠電泳,，可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核后上樣。

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