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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品專門(mén)用于真菌 RNA 的純化。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.柱式操作,，更加簡(jiǎn)單快捷,，整個(gè)過(guò)程只需要約 30 分鐘。

2.RNA 純度高,，OD260/280 一般都在 2.0 左右,，可直接用于 RT-PCR、 Northern 雜交,、microarray hybridization、 cDNA 合成等實(shí)驗(yàn),。

3.RNA 產(chǎn)量高,，一般在 20-70 μg/mL 酵母培養(yǎng)物(約 2E7 個(gè)細(xì)胞)。

4.非酶細(xì)胞破裂法,，適用于各種形態(tài)和各個(gè)種屬的真菌,，包括Candidaalbican、          Saccharomycescerevisiae、Schizosaccharomycespombe,、Pichiapastoris等,。

5.本產(chǎn)品足夠 50 次微量純化實(shí)驗(yàn)。

6.真菌RNA純化試劑盒（過(guò)柱法）只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成 份規(guī) 格包裝材料

真菌 RNA 純化溶液 A20 mL30 mL 本色瓶

真菌 RNA 純化溶液 B25 mL30 mL 棕色玻璃瓶

真菌 RNA 純化溶液 C75 mL125 mL 本色瓶

真菌 RNA 純化溶液 D25 mL30 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存,，有效期一年。

自備試劑

氯仿

使用方法：

1.將 50 mg 左右的干菌絲(或 100 mg 左右的鮮菌絲,、適當(dāng)數(shù)量的真菌菌落)轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中,。如果是液體真菌培養(yǎng)物，則直接將 1-10 mL 液體真菌在 1.5 mL 塑料離心管中 12,000-15,000×g 離心 1 分鐘,，并棄盡液體培養(yǎng)基（可以分多次離心）,。

2.加入 0.4 mL 真菌 RNA 純化溶液 A 并充分吹打混勻。如果真菌 RNA 純化溶液 A 存放時(shí)產(chǎn)生沉淀,，請(qǐng)置于 65℃融化,，用前充分搖晃均勻。

3.加入 0.4 mL 溶液 B,，劇烈振蕩 30 秒,。

4.65℃保溫 5 分鐘。

5.室溫 12,000-15,000×g 離心 3-5 分鐘,，轉(zhuǎn)移上清到一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中,。

6.再加入 0.1 mL 真菌 RNA 純化溶液 B 和 0.1 mL 自備氯仿，振蕩混勻 30 秒,。

7.室溫 12,000-15,000×g 離心 3-5 分鐘,，轉(zhuǎn)移上清到一自備的、干凈的 5 mL 塑料離心管中,。

8.加入相當(dāng)于上清 3 倍體積的真菌 RNA 純化溶液 C（約 1.2-1.5 mL）和 1 倍體積的溶液 D（約 0.4-0.5 mL）,，充分混勻。

9.將混合液（約 2.5 mL）分 3-4 次轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,。每次 13,000-15,000×g 室溫離心半分鐘,，棄收集管中的穿透液。

10.用 0.5 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中,，室溫離心半分鐘,，棄收集管中的穿透液。

11.一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì),。但如果樣品 OD260/280 比值不高,，可以再用 0.5 mL 通用洗柱液重復(fù)此步一次。

12.室溫離心半分鐘,。此步十分重要,，否則殘留的洗柱液會(huì)影響 RNA 的使用,。

13.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的 RNase-free 1.5 mL 塑料離心管中，加入 30-100 μL RNA 洗脫液,。

14.室溫離心半分鐘,，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用,。

15.RNA 完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做 Northern 雜交,，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳。

16.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH 7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在 OD260 的光吸收,。通過(guò)光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL）,，進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/真菌用量)。注意不要將 RNA稀釋在DEPC 水中檢測(cè) OD260 和 OD280,，否則光吸收比在 TE 中測(cè)得的低 10%-15%,。

17.RNA 純度測(cè)定：無(wú)污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，OD260/OD230 一般在 2.0-2.3 之間,，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)或多糖的污染,，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。蛋白質(zhì)污染可以通過(guò)酚/氯仿抽提一次然后酒精沉淀去除,，DNA 和多糖污染可以分別用多糖清除劑去除,。測(cè) OD 時(shí) RNA 不能過(guò)度稀釋使 OD 讀數(shù)低于儀器的有效范圍，如果低于一起的檢測(cè)范圍,，該讀數(shù)無(wú)效,。

選擇我們的真菌RNA純化試劑盒（過(guò)柱法），就是選擇精準(zhǔn),、高效,、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！