日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是基于Feinberg 和Vogelstein 發(fā)明的隨機(jī)引物標(biāo)記法而開發(fā)出來(lái)的即用型 DNA 探針標(biāo)記試劑盒,，標(biāo)記過(guò)程由雙鏈 DNA 熱變性、隨機(jī)引物與單鏈 DNA 結(jié)合,、在 Klenow DNA 聚合酶催化下,，引物的延伸合成 DNA 探針并摻入標(biāo)記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.提供的標(biāo)記反應(yīng)液整合了除酶和模板外的所有成分,，簡(jiǎn)化了反應(yīng)加樣步驟,，提高了標(biāo)記反應(yīng)的可重復(fù)性。

2.使用無(wú)外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶,，已標(biāo)記DNA 探針不會(huì)被酶降解,，探針產(chǎn)量更高。

3.快速,，最快 1 小時(shí)即可完成標(biāo)記反應(yīng),。

4.得到的 DNA 探針比活性高（如果是同位素，可以達(dá)到 10E9 cpm/ug DNA）,。

5.所需模版 DNA 量少,，模板可以是線狀或環(huán)狀的、也可以是單鏈或雙鏈的,，但長(zhǎng)度必須在 100 bp 以上,。

6.得到的探針長(zhǎng)度一般在 200-400 nt 之間（如果模板長(zhǎng)度在 1kb 以上），可以用于 Southern 雜交,、Northern 雜交,、原位雜交、菌落和斑點(diǎn)印跡雜交等,。

7.本產(chǎn)品足夠 5 次標(biāo)記實(shí)驗(yàn),。

8.隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒（自備標(biāo)記核苷酸型）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份  規(guī)格包裝

10×隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)液10 μL0.5 mL 綠蓋管

(自備標(biāo)記核苷酸型)

Klenow exo-聚合酶 5 μL0.5 mL 紅蓋管

dATP,，2 mM 10μL0.5 mL 白蓋管

dTTP,，2 mM 10μL0.5 mL 紫蓋管

dGTP，2 mM 10μL0.5 mL 藍(lán)蓋管

dCTP，2 mM 10μL0.5 mL 黃蓋管

標(biāo)記專用隨機(jī)引物溶液 10μL0.5 mL 橙蓋管

超純水 1 mL1.5 mL 本色管

使用手冊(cè) 1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期一年。

自備試劑

0.5 M EDTA（pH 8.0）,，需要自備標(biāo)記的核苷酸,。

使用方法：

注意：隨機(jī)引物標(biāo)記效率跟起始模板量和保溫時(shí)間相關(guān)，雜交時(shí)需要探針 DNA 必須達(dá)到一定的濃度,，其中探針/模板比越高,，沒(méi)有標(biāo)記的模板 DNA 對(duì)雜交的競(jìng)爭(zhēng)性抑制越低。用戶在實(shí)驗(yàn)前可以根據(jù)下表選擇合適的起始模板量和保溫時(shí)間：

1. 在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：

成分用量

模板 DNA50-150 ng

隨機(jī)引物2 μL

10×隨機(jī)引物標(biāo)記反應(yīng)液2 μL

超純水補(bǔ)水到 15 μL

注意：非同位素標(biāo)記基團(tuán)（如生物-素和地-高辛）疏水性強(qiáng),，易與塑料離心管表面非特異性結(jié)合,，所以要硅化塑料離心管。模板 DNA 并非越多越好,，否則沒(méi)有標(biāo)記的模板 DNA 在雜交時(shí)會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地抑制標(biāo)記 DNA 跟靶分子的雜交,，反而降低雜交信號(hào)強(qiáng)度。

2.沸水浴 10 分鐘,，或在PCR 儀上 100℃加熱 10 分鐘徹-底變性模板 DNA,，結(jié)束后需要立即放冰上待用。不能緩慢降溫,，否則變性的模板 DNA 單鏈又會(huì)雜交形成雙鏈,。

3.離心數(shù)秒使所有液體集中在管底，如果標(biāo)記物為 dTTP 則加入除 dTTP 之外的三種核苷酸（dATP,、dGTP,、dCTP）各 1 μL（共 3 μL，濃度均為 2mM）,，自備的 dTTP/標(biāo)記dUTP 混合物 1μL,，最后加入 1 μL Klenow exo 聚合酶。如果標(biāo)記物為 dCTP 則加入除 dCTP 之外的三種核苷酸（dATP,、dGTP,、dTTP）各 1 μL，以此類推,。

注：dTTP/標(biāo)記 dUTP 混合物中dTTP 和標(biāo)記 dUTP 的總濃度必須達(dá)到2mM,， dTTP 與生物-素標(biāo)記dUTP 或地-高辛標(biāo)記的 dUTP 的比例在 65：35 為最佳。但如果使用自備的其他標(biāo)記核苷酸,，如 fluorescein,、hydroxycoumarin、 resorufin 和 aminoallyl 標(biāo)記的 dUTP,，則用戶需要自己摸索其與 dTTP 之間的最佳比例,，如果使用 32P 標(biāo)記的dUTP,，則比活最好為 3000Ci/mmol，濃度為好為 10uCi/μL,，并且不需要加入 dTTP,。

4.輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上,，離心數(shù)秒使所有液體集中在管底,。

5.37℃保溫 1-20 小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后加熱 100℃ 5 分鐘使 DNA 聚合酶變性,， 同時(shí)使 DNA 探針變性成單鏈，然后立即冰上冷凍,。不能緩慢降溫,，否則變性的模板 DNA 單鏈又會(huì)雜交形成雙鏈。

6.變性后的標(biāo)記反應(yīng)液可以放-20℃長(zhǎng)期保存,，也可以直接加入到雜交反應(yīng)液中進(jìn)行雜交,。如果電泳檢測(cè)，標(biāo)記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài),。

注意：本方法標(biāo)記核苷酸摻入率極-高,，因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化,， 不要用酚抽提法純化非同位素標(biāo)記的 DNA 探針,，因?yàn)檫@些標(biāo)記分子（如生物-素或地-高辛等）疏水性強(qiáng)，能使標(biāo)記的 DNA 進(jìn)入疏水的有機(jī)相而丟失,。只能選擇乙醇直接沉淀或 Sephadex G50 過(guò)柱回收（需另購(gòu)柱式探針純化試劑盒）,。對(duì)比活高

的同位素標(biāo)記探針，由于同位素其極其不穩(wěn)定,，因此應(yīng)該立即使用,，不要長(zhǎng)久放置。

選擇我們的隨機(jī)引物法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒（自備標(biāo)記核苷酸型）,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！