目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>溶液>> 高效核酸雜交液(Oligo 探針專用)
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更新時(shí)間:2025-04-24 11:02:08瀏覽次數(shù):42評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10mL |
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貨號(hào) | XY-D-1743 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | / |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 1年 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
核酸雜交是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進(jìn)行雜交,由此檢測(cè)印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子,。當(dāng)探針是 Oligo 分子時(shí),,需要使用專門的核酸雜交液,本產(chǎn)品就是為此開發(fā)的 Oligo 探針專用雜交液,。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.即開即用,,使用方便。
2.既可以用于 DNA Oligo 探針雜交,,也可以用于 RNA Oligo 探針雜交,。
3.本產(chǎn)品足夠 5 平方厘米印跡膜的 10 次核酸雜交。
4.高效核酸雜交液(Oligo 探針專用)只可用于科研,。
產(chǎn)品參數(shù):
成分規(guī)格包裝
高效核酸雜液(Oligo 探針專用)10 mL10 mL 本色瓶
使用手冊(cè)1 份無
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,,-20℃保存,有效期一年,。
自備試劑
印跡膜,,Oligo 探針,6×SSC,,2×SSC,,0.1×SSC
使用方法:
一、雜交溫度的確定
1.Oligo 探針的最佳雜交溫度一般比Tm 低5℃,。計(jì)算Tm 的公式是Tm=GC數(shù)量×4℃+AT 數(shù)量×2℃,。但由于 Oligo 較短,更容易受各種因素影響
(如錯(cuò)配率,、修飾堿基比例等),,所以最佳溫度可能還需要適度摸索和優(yōu)化。Oligo 探針可以在室溫洗膜,。
二,、預(yù)雜交
2.將轉(zhuǎn)膜所得的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6×SSC 溶液中,使其充分濕潤,。
3.將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋最好預(yù)先封口,,再剪掉一 角,,留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 本產(chǎn)品的比例沿小口加入本產(chǎn)品,,然后用塑料封口機(jī)將口封牢,。
4.將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在最佳雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中, 保溫 1-2 小時(shí),,延長到 12-16 小時(shí)亦可,。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停的搖動(dòng)狀態(tài)中,使本產(chǎn)品與印跡膜充分接觸,。
三,、雜交
5.將 Oligo 探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪刀剪一小口,加入 Oligo 探針后用熱封機(jī)封口),。Oligo 探針的加入量視探針標(biāo)記效率而定,,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷貝基因,,Oligo 探針的加入量應(yīng)加大,,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則 Oligo探針的量可減少,。如果是放射性 Oligo 探針,,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免雜交袋發(fā)生遺漏,、污染工作環(huán)境。
6.在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí),。四、洗膜
7.雜交完畢,,取出塑料袋,,剪去一角,倒出所有的含 Oligo 探針的雜交液,。
此含 Oligo 探針的雜交液可以多次使用,。
8.剪開雜交袋,用鑷子取出印跡膜,,浸沒于大量的 2×SSC(含 0.5 % SDS)溶液中,,室溫下振蕩漂洗 15 分鐘。洗膜時(shí)一定不要使印跡膜干燥,。
9.重復(fù)上步操作一次,。
10.將印跡膜轉(zhuǎn)移至 0.1×SSC(含 0.1% SDS)溶液中,在計(jì)算好的洗膜溫度下振蕩漂洗 30 分鐘至 1 小時(shí),。
11.重復(fù)上步操作一次,。
12.將印跡膜轉(zhuǎn)移到濾紙上,,吸去表面液體后印跡膜即可用于后續(xù)檢測(cè)。
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