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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是氯仿-異戊醇（Chloroform-Isoamyl Alcohol, CI）的 24:1 的混合液，用于核酸提取時(shí)去除蛋白質(zhì),、多糖,、脂類(lèi)和酚類(lèi)等雜質(zhì)。

再基于苯-酚的核酸純化中,，苯-酚的作用是使裂解液中的蛋白質(zhì)變性,，同時(shí)抑制核酸酶對(duì)核酸的降解。用苯-酚處理裂解液時(shí),，由于蛋白分子表面的很多極性基團(tuán)與苯-酚相似相溶,，故蛋白分子溶于酚相,，而核酸溶于水相，從而將核酸和蛋白質(zhì)分開(kāi),。但苯-酚和水有 10%左右的互溶,，因此酚抽提后，必須用 CI 混合液處理以讓水和酚徹-底分開(kāi),，徹-底去除水相中 10%左右的殘留苯-酚,，否則它們會(huì)嚴(yán)重抑制后續(xù)的酶反應(yīng)。CI 混合液中異戊醇的作用是降低表面張力,，從而減少操作過(guò)程（常常有震蕩步驟）中氣泡的產(chǎn)生,，而這些氣泡的表面張力可能會(huì)使核酸斷裂。另外,，異戊醇還有助于水相和酚相分相,，使離心后的上層水相（含核酸）、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定,，便于移取上清,。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

CI 混合液（24:1，核酸純化用）250 mL250 mL 棕玻瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存,，有效期為 12 個(gè)月,。

自備試劑

無(wú)

使用方法：

如果用于沉淀法回收核酸，則需要無(wú)水乙醇或異丙醇,、3 M 乙酸鈉溶液 pH 5.2,、75%乙醇和超純水。如果用于過(guò)柱法回收核酸,，則需要硅膠模離心吸附柱,，上柱 液，洗柱液和超純水,。

該試劑為基于苯-酚的核酸提取過(guò)程中的必須試劑,，使用方法參考分子克隆手冊(cè)等參考書(shū)， 或?qū)嶒?yàn)室 SOP,。下列操作僅以 0.5 mL 樣本供參考,。

一、沉淀法：

1.將 0.5 mL 含核酸的細(xì)胞裂解液,，或含有核酸,、DNA、蛋白質(zhì),、脂類(lèi)的混合液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中,。

2.加入 0.5 mL 的自備 Tris-飽和酚（對(duì) DNA 純化）或酸酚（對(duì) RNA 純化）和 0.2 mL 的本產(chǎn)品。

3.渦旋震蕩 2 分鐘。

4.常溫 13000×g 離心 5 分鐘,，溶液將呈兩層相,。將含有核酸的水相轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。兩相的相對(duì)位置跟樣本比重有關(guān),，并不是任何時(shí)候無(wú)色水相都在上層,。如果樣本含鹽濃度高，比重大,，水相也可能在下層,。

5.在上清中加入 0.1 倍體積的 3 M 乙酸鈉溶液，pH 5.2 和兩倍體積的自備無(wú)水乙醇（兩倍體積的乙醇可以用一倍體積的異丙醇替代）,，顛倒 10 次充分混勻,。

6.常溫 13000×g 離心 15 分鐘。

7.小心棄上清,，不要觸及管底離心面的沉淀,。

8.加入 1 mL 75%乙醇，顛倒 10 次,。

9.常溫 13000×g 離心 3 分鐘。

10.小心棄上清后短暫離心 30 秒,，去掉殘留的液體（約 50uL）,。

11.室溫敞開(kāi)蓋子兩分鐘。

12.加入超純水溶解核酸,，然后進(jìn)行濃度測(cè)定,、電泳，PCR 等后續(xù)檢測(cè),。

二,、過(guò)柱法：

13.將 0.5 mL 含核酸的細(xì)胞裂解液，或含有核酸,、DNA,、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)的混合液轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 塑料離心管中,。

14.加入 0.5 mL 的自備 Tris-飽和酚（對(duì) DNA 純化）或酸酚（對(duì) RNA 純化）和 0.2 mL 的本產(chǎn)品,。

15.渦旋震蕩 2 分鐘。

16.常溫 13000×g 離心 5 分鐘,，溶液將呈兩層相,。將含有核酸的無(wú)色水相轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中。兩相的相對(duì)位置跟樣本比重有關(guān),，并不是任何時(shí)候無(wú)色水相都在上層,。如果樣本含鹽濃度高，比重大，也可能在下層,。

17.在上清中加入 2 倍體積的自備上柱液,，所用體積跟所用上柱液的配方相關(guān)。

18.顛倒混勻,，取 0.7 mL 樣本和上柱液的混合液上柱,。

19.常溫 13000×g 離心半分鐘，棄穿透液,。

20.再取 0.7 mL 樣本和上柱液的混合液上同一個(gè)柱子,。

21.常溫 13000×g 離心半分鐘，棄穿透液,。

22.重復(fù)第 20-第 21 步,，直到混合液全部上柱。

23.加入 0.7 mL 洗柱液,。

24.常溫 13000×g 離心半分鐘,，棄穿透液。

25.重復(fù)第 23 和第 24 步一次,。

26.不加任何溶液,，將吸附柱離心半分鐘。

27.在吸附柱中加入 30-50 μL 的超純水,，室溫放置 2 分鐘后,，將吸附柱放入一個(gè)新的 1.5 mL 離心管中，13000×g 離心半分鐘,，收集的穿透液就是純化的核酸溶液,。

28. 對(duì)所得的核酸溶液進(jìn)行濃度測(cè)定、電泳,，PCR 等后續(xù)檢測(cè),。

選擇我們的CI 混合液（24:1，核酸純化用）,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！