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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

分枝桿菌屬（Mycobacterium）是一類極為古老的革蘭氏陽性細(xì)菌屬,，它具有不同于別的細(xì)菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),，其靠近細(xì)胞膜的部分是其他革蘭氏陽性細(xì)菌都具有的肽聚糖層， 該層通過磷酸二酯鍵與分枝酸-阿拉伯半乳糖-肽聚糖復(fù)合層共價(jià)連接,。分枝酸是含 70～90 個(gè)碳原子的枝鏈脂肪酸,，位于 MAPc 的外層，分枝桿菌因此而得名,。MAPc 層之外為糖化脂質(zhì)層（glycolipid）,，它與分枝酸相連，成分主要是磷脂,，占細(xì)胞壁干重的比例高達(dá) 60%,，所以分枝桿菌疏水性很強(qiáng)，不能使用革蘭氏染色。分枝桿菌細(xì)胞壁還含有貫穿整個(gè)細(xì)胞壁的脂阿拉伯糖甘露聚糖,，它是一種含阿拉伯糖和甘露糖的磷酸化的,、不均一混合物，其末段所連接的成分的不同與細(xì)菌對(duì)巨噬細(xì)胞反應(yīng)的不同密切相關(guān),。分枝桿菌細(xì)胞壁的上述特點(diǎn)使得用常規(guī)方法純化其 DNA 非常困難,。本產(chǎn)品就是為解決這一問題而開發(fā)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.       操作簡(jiǎn)單,，客戶不需要準(zhǔn)備額外的試劑,。

2.       適用于整個(gè)分枝桿菌屬。

3.       獲得的基因組 DNA 足夠進(jìn)行后續(xù)的核酸擴(kuò)增或酶切處理,。PCR 檢測(cè)靈敏度一般在10-100 CFU/mL 樣品,。

4.       既可以使用培養(yǎng)的分枝桿菌，也可以使用從痰液,、精液,、血液、腦脊液等樣品中分離的分枝桿菌,。

5.       安全無毒,，本試劑盒對(duì)人體無害，無腐蝕性和刺激性氣味,。

6.       本產(chǎn)品足夠 50 次分枝桿菌 DNA 的純化實(shí)驗(yàn),。

7.       分枝桿菌 DNA 純化試劑盒（過柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

分枝桿菌 DNA 純化溶液 A7.5 mL10 mL 本色瓶

分枝桿菌 DNA 純化溶液 B15 mL15 mL 棕玻瓶

分枝桿菌 DNA 提取溶液 C30 mL30 mL 本色瓶

化痰液成分（干粉）5 g10 mL 本色瓶

離心吸附柱50 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份1 份

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸,，但化痰液成分（干粉）和分枝桿菌 DNA 純化溶液 B 需要 4℃保存,，有效期一年。

自備試劑

TE 緩沖液,，氯仿,。

使用方法：

注意：文獻(xiàn)報(bào)道部分分枝桿菌在 DNA 提取過程中還有形成菌落的能力，所以任何丟棄的溶液都必須按有傳染性的污染物品對(duì)待,，并嚴(yán)格按有關(guān)要求進(jìn)行消毒處理,。

一: 培養(yǎng)的分枝桿菌樣品的預(yù)處理

1.刮取培養(yǎng)皿培養(yǎng)的分枝桿菌到 0.5 mL 自備 TE 緩沖液中。

2.80℃放置 20 分鐘以殺滅分枝桿菌,。

3.3,000× g 室溫離心 15 分鐘,，棄上清。

4.將分枝桿菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進(jìn)入到第四步的分枝桿菌基因組 DNA 提取步驟,。

二: 含分枝桿菌的痰液樣品的預(yù)處理

1.將痰液樣品(0.5 mL-2 mL)加入到干凈的 10 mL 或 15 mL 塑料離心管中,。

2.加 2 mL 的自備蒸餾水，再加入 100 mg 化痰液干粉,，充分混合均勻后室溫放置 15-30 分鐘,。如果痰很濃,，可以延長(zhǎng)保溫時(shí)間 30 分鐘。

3.3,000×g 室溫離心 15 分鐘,，棄上清,。

4.將分枝桿菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進(jìn)入到第四步的分枝桿菌基因組 DNA 提取步驟。

三: 含分枝桿菌的血液樣品的預(yù)處理

1.用自備紅細(xì)胞裂解液對(duì)血液進(jìn)行紅細(xì)胞裂解處理（可另購本公司紅細(xì)胞裂解液產(chǎn)品）,。

2.將得到的白細(xì)胞沉淀放-20℃或更低溫度放置 10 分鐘,。

3.迅速將得到的白細(xì)胞沉淀 100℃加熱 10 分鐘,。

4.上述處理將使大部分白細(xì)胞破裂,，加入自備的 TE 到離心管體積的一半位置,。此步使白細(xì)胞的 DNA 進(jìn)入緩沖液中。

5.離心 5-10 分鐘沉淀分枝桿菌,，離心速度取決于離心管的大小,。如果樣品在 1.5 mL 離心管，則可以 12,000-15,000×g 室溫離心,。如果樣品在 10-15 mL 離心管,，則3,000-5,000×g 室溫離心,。

6.吸棄上清(含白細(xì)胞 DNA),，將所得分枝桿菌沉淀放-20℃冰箱備用或直接進(jìn)入到第四步的分枝桿菌基因組 DNA 提取步驟。

四: 分枝桿菌基因組 DNA 的提取

1.將 150 μL 65℃預(yù)熱過的分枝桿菌DNA 純化溶液A 加到有分枝桿菌沉淀的螺旋蓋離心管中,，充分震蕩混勻,。

2.將混合物轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的 1.5 mL 塑料螺旋蓋離心管中。強(qiáng)烈建議不要使用壓蓋式塑料離心管,，否則后面處理過程溶液容易漏出,。

3.加入 300 μL 分枝桿菌 DNA 純化溶液 B 和 300 μL 自備氯仿，充分震蕩混勻,。

4.-20℃放置直到液體凝固,，一般需要 30 分鐘,。過夜放置也可。也可以-80℃放置 10 分鐘直到液體凝固,。

5.放室溫融化后振蕩半分鐘,。

6.12,000-15,000× g 室溫離心 3-5 分鐘，小心轉(zhuǎn)移全部上清到一個(gè)新離心管中,。

7.加入等體積的分枝桿菌 DNA 純化溶液 C,，顛倒混勻。

8.將液體轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,，室溫放置 2 分鐘,。 9. 12,000-15,000×g 室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。

10.加入 0.5 mL 通用洗柱液 12,000-15,000×g 室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。

11.重復(fù)上步的洗滌過程一次。

12.短暫離心半分鐘,。此步不要省略,，否則殘留的洗柱液（含乙醇）將會(huì)影響 DNA 電泳、酶切和 PCR 等反應(yīng),。

13.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的離心管中,，加入 50 μL DNA 洗脫液（基因組純化專用）， 12,000-15,000×g 室溫離心半分鐘,，所得溶液即分枝桿菌基因組 DNA,。

14.直接取 5-10 μL 電泳檢測(cè) DNA，其余放冰箱備用或用于后續(xù)反應(yīng)。

選擇我們的分枝桿菌 DNA 純化試劑盒（過柱法）,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測(cè)方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！