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產(chǎn)品簡介：

人工合成的 PCR 引物、linker 和 adaptor 的 5′端一般都是羥基基團(tuán)而不是磷酸基團(tuán)（除非額外付費(fèi)要求在人工合成時加上磷酸基團(tuán)）,，而任何 DNA 連接酶都不能將一個 DNA 分子 5′端的羥基基團(tuán)和另一個 DNA 分子 3′端的羥基基團(tuán)進(jìn)行連接,，因此通過人工合成的 DNA 片段和天然 DNA 之間的連接效率一般都比天然 DNA 彼此的連接效率低（天然 DNA 4 個端口均可連接，人工合成的 DNA 跟天然 DNA 有 2 個端口可以連接,，人工合成的 DNA 之間沒有任何端口可以連接）,，尤其是在平末端連接時。本公司開發(fā)的 DNA 磷酸化產(chǎn)品能將 DNA 分子 5′端的羥基基團(tuán)磷酸化,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.可以快速把 DNA 5′端的羥基基團(tuán)變成磷酸基團(tuán),，使人工合成的 DNA（包括 PCR 產(chǎn)物）跟天然 DNA 一樣有高的連接效率,。

2.既可以對單鏈 DNA 進(jìn)行磷酸化處理，也可以對雙鏈 DNA 片段同時磷酸化處理,。

3.處理后的 DNA 可以直接用于連接反應(yīng),、克隆等，不需要純化,。

4.本產(chǎn)品足夠 20 次 DNA 的磷酸化實(shí)驗(yàn),。

5.DNA 片段磷酸化試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成份規(guī)格包裝材料

DNA 磷酸化 Mix40 μL0.5 mL 紅蓋管

ATP 溶液（10 mM）100 μL0.5 mL 白蓋管

超純水1 mL1.5 mL 藍(lán)蓋管

使用手冊1 份1 份

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸,，-20℃保存,，有效期為一年。

自備試劑

引物,、PCR 產(chǎn)物,、DNA 片段

使用方法：

一：雙鏈 DNA 片段的磷酸化

注意：如果是 PCR 產(chǎn)物，一定要先膠回收,，不能使用沒經(jīng)過純化的 PCR 反應(yīng)液,，因?yàn)槠渲袣埩舻拇罅康?PCR 引物會耗掉大量的激酶，降低 PCR 產(chǎn)物的磷酸化效率,。

1,、在 1.5 mL 離心管中配制下列反應(yīng)液（20 μL）：

成分用量

PCR 膠回收片段2 μL（不超過 10 pmol）

DNA 磷酸化 Mix2 μL

ATP 溶液（10 mM）5 μL

加超純水到20 μL

2、37℃反應(yīng) 30 分鐘,。

3,、70℃熱處理 5 分鐘滅活 T4 多核苷酸激酶。

4,、可不經(jīng)過純化直接用于后續(xù)克隆,，但加入量不要超過連接反應(yīng)總體積的 1/5。二：單鏈 DNA 片段的磷酸化

注：單鏈 DNA 包括局部雙鏈的 DNA,、引物,，linker，adaptor,，Oligo 探針等,。

5、在 1.5 mL 離心管中配制下列反應(yīng)液（20 μL）：

6,、37℃反應(yīng) 30 分鐘,。

7、70℃熱處理 5 分鐘滅活 T4 多核苷酸激酶,。

8,、可不經(jīng)過純化直接用于后續(xù)克隆，但加入量不要超過連接反應(yīng)總體積的 1/5,。如果需要提高磷酸化 DNA 的濃度,，可用乙醇沉淀法濃縮 DNA（見附）,。DNA 的濃度低于 5 pmol，在乙醇沉淀時還需要加入 DNA 助沉劑（需要另行購買）,。沉淀得到的 DNA 可溶解在適量的水中以便得到所需的濃度,。

附：乙醇沉淀濃縮 DNA(本試劑盒不提供相關(guān)試劑，下列操作流程僅供參考)：

1,、在 DNA 溶液中加入 0.1 倍體積的 3 M 乙酸鈉溶液（pH 5.2）,，100 μL DNA 溶液加 10 μL 乙酸鈉溶液。

2,、再加入 2.5 倍體積的無水乙醇,。100 μL DNA 溶液加 250 μL 無水乙醇。

3,、混勻后 12,000×g 常溫離心 10 分鐘,，小心棄上清。

4,、加入 1 mL 70%乙醇,，短暫離心 3 分鐘后小心棄上清。

5,、短暫離心 5 秒,，吸棄殘留液體（約 30-50 μL）。

6,、室溫放置 2 分鐘干燥后加入適量的超純水溶解 DNA，立即使用或放-20℃長期保存,。

選擇我們的DNA 片段磷酸化試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！