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產(chǎn)品簡介：

RT-LAMP MasterMix 含有 RT-LAMP 擴(kuò)增所需的所有成分， 可以用于RT-LAMP 等溫擴(kuò)增,。RT-LAMP 即 Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆轉(zhuǎn)錄-環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增），它利用 4 條模板專一的特異引物,、逆轉(zhuǎn)錄酶和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶,，在等溫條件下(63℃左右) 30－60 分鐘完成逆轉(zhuǎn)錄和 LAMP 擴(kuò)增。該技術(shù)在靈敏度,、特異性和檢測范圍等指標(biāo)上能媲美甚至優(yōu)于定性 RT-PCR 技術(shù),，同時還不需要昂貴的儀器設(shè)備。目前已成功應(yīng)用于生物的快速檢測,，廣泛用于各個領(lǐng)域,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開即用，含有紅色電泳示蹤劑,，擴(kuò)增后可以直接上樣,，不需要上樣液。

2.高特異性,，精心優(yōu)化的配方,，非特異擴(kuò)增比自配的試劑更低,。

3.高擴(kuò)增效率，一般比 RT-PCR 靈敏一個數(shù)量級,。

4.65℃左右逆轉(zhuǎn)錄和等溫擴(kuò)增,，不需要貴重儀器。

5.本試劑盒足夠 50 次 20 ?L 體系的 RT-LAMP 擴(kuò)增,。

6.提供擴(kuò)增對照,，便于在遇到困難時分析原因。

7.20 ?L 體系可以加 10 ?L 的模板,。

8.RT-LAMP MasterMix（電泳法）只能用于科研,，不能用于臨床。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

RT-LAMP MasterMix

（含電泳示蹤劑,，待加酶）200 ?L0.5 mL 白蓋管

逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液100 ?L0.5 mL 紅蓋管

陽性對照模板-引物混合物50 ?L0.5 mL 藍(lán)蓋管

使用手冊1 份無

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，有效期一年,。

自備試劑

RNA 模板,、RT-LAMP 引物

使用方法：

1.制備模板RNA：用于選用合適的方法制備模板RNA。如果有N個樣品,，最好設(shè)置N+2個樣品制備,，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照,。

2.配制5×RT-LAMP引物混合液,。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到標(biāo)準(zhǔn)所標(biāo)注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水,，最后

得到1 mL的5×RT-LAMP 引物混合液,，此混合液足夠250次20 ?L體系的LAMP擴(kuò)增。如果需要配制的5×RT-LAMP引物混合液體積異于1 mL,，則各成分的用量請按比例調(diào)整,。引物混合液可以在-20℃放置2年。

注：如果沒有Loop引物,，則用水替代,。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（待加酶），混勻,，稍離心,。第一次使用時， 請將100uL 逆轉(zhuǎn)錄酶-擴(kuò)增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并輕柔混勻,，然后再使用,。如果有N個樣品，則在N+2個反應(yīng)管中加入以下組份,，  多出的一管是RT-LAMP擴(kuò)增陽性對照（PC）,，一管是RT-LAMP擴(kuò)增陰性對照

（NC）：

成份N+2 個樣品管RT-LAMP

擴(kuò)增PCRT-LAMP

擴(kuò)增 NC

RT-LAMP MasterMix

（加酶后）6 ?L6 ?L6 ?L

自備 5×RT-LAMP 引物

混合液4 ?L不加4 ?L

陽性對照模板-引物混合物不加4 ?L不加

自備模板 RNA1-6 ?L不加不加

補(bǔ)自備超純水到20 ?L20 ?L20 ?L

注意：由于本產(chǎn)品含有電泳示蹤劑,，不宜加入可視化染料，否則會產(chǎn)生顏色干擾,?？杉尤肽承晒馊玖希唧w可以加入哪些,，需要預(yù)先測試電泳示蹤劑對熒光染料的影響,。如果加入了熒光染料，則需要在熒光定量PCR儀上進(jìn)行反應(yīng)和實(shí)時檢測,。

4.混勻,，置于65℃保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫,，必須加熱蓋,。如果用金 屬浴或水浴保溫，沒有熱蓋,，必須覆蓋50uL的石蠟油,，否則保溫期間反應(yīng)體系的水分會蒸發(fā)，嚴(yán)重影響反應(yīng)效率,。

5.擴(kuò)增結(jié)束后取5-10 ?L擴(kuò)增產(chǎn)物直接上樣（本產(chǎn)品含有紅色電泳示蹤劑，不需要再加上樣液,，紅色示蹤劑的泳動速度相當(dāng)于50 bp的DNA）進(jìn)行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳,，有RT-LAMP擴(kuò)增的樣品將可見LAMP特征性DNA梯度電泳圖譜

6.結(jié)果分析：如果本試劑盒提供的陽性對照-引物混合物能夠擴(kuò)增而陰性對照不能擴(kuò)出，則實(shí)驗(yàn)有效,。如果陽性對照-引物混合物沒有擴(kuò)增出條帶,，則試劑盒的問題，請跟廠家聯(lián)系,。如果陰性對照（水作為模板）有擴(kuò)增出條帶,，則說明RT-LAMP 樣品或試劑有過去的擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，需要注意操作的規(guī)范性,，如果不能解決,，

可以重新設(shè)計RT-LAMP引物擴(kuò)增新的靶片段。

選擇我們的RT-LAMP MasterMix（電泳法）,，就是選擇精準(zhǔn),、高效、可靠的檢測方案,，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,！