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產(chǎn)品簡介：

堿變性法是最常見的質(zhì)粒 DNA 提取方法,，其過程是首先菌體經(jīng)離心懸浮后,，細胞被 SDS 和堿裂解,，并且堿使基因組 DNA 和質(zhì)粒DNA 變性,，隨后用酸中和，質(zhì)粒DNA 可以快速復性,，而基因組 DNA 不能快速復性,，故可以通過離心去除。如果用柱式法,，則含質(zhì)粒 DNA 的上清用離心吸附柱吸附質(zhì)粒DNA,，洗去雜質(zhì)，得到純化的質(zhì)粒 DNA,。但此方法不適合特別大的質(zhì)粒,。因此本公司推出沉淀法，用于純化柱式法不能回收的質(zhì)粒 DNA,。

產(chǎn)品特點：

1.快速,、步驟少，整個操作在 40 分鐘左右完成,。

2.質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B 中有藍色染料,，便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況，保證實驗效果,。

3.產(chǎn)量高,，一次可以處理 1-5 mL 過夜培養(yǎng)的菌液，每毫升過夜培養(yǎng)的菌液可以提取到 2-5 ?g/mL（取決于質(zhì)粒是高拷貝,、中拷貝還是低拷貝）,。

4.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取。

5.純度高,，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間,，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化,、測序及PCR 等。

6.質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒（沉淀法）只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

成分規(guī)格包裝

質(zhì)粒 DNA 純化溶液A13 mL15 mL 本色瓶

質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B13 mL15 mL 棕色瓶

質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C18 mL30 mL 本色瓶

RNase A 溶液,，10 mg/mL0.6 mL1.5 mL 本色管

去蛋白溶液30 mL30 mL 棕玻瓶

質(zhì)粒沉淀液30 mL30 mL 本色瓶

DNA 洗脫液（基因組純化專用）10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊1 份無

保存和運輸

常溫運輸和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存低溫運輸,，有效期一年,。

自備試劑

75%乙醇。

使用方法：

從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養(yǎng)基中,，37℃震蕩培養(yǎng) 12-16 小時（搖床轉(zhuǎn)速 200-300）,。注意：建議使用 LB 培養(yǎng)基,，營養(yǎng)更豐富的培養(yǎng)基會使菌體濃度過高，超過純化系統(tǒng)的處理能力而降低質(zhì)粒 DNA 的質(zhì)量,。另外,，延長培養(yǎng)時間會因細胞死亡、裂解而造成質(zhì)粒 DNA 濃度降低,。

2.用 1.5 mL 離心管收集 1-5 mL 過夜培養(yǎng)飽和菌液,，室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，棄上清,，再短暫離心,，吸棄殘留液體。

3.第一次使用本試劑盒時,，先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到質(zhì)粒DNA 純化溶液 A（簡稱溶液 A,，下同）中，搖勻后再取用,，未用完的溶液 A 放 4℃ 保存,。

4.加入 250 ?L 溶液 A 到第 2 步得到的細菌沉淀中，用槍頭充分吹打使菌體重懸,。注意：細胞未充分懸浮會影響后續(xù)堿變性,，可以使用漩渦振蕩器混勻或使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。

5.加入 250 ?L 質(zhì)粒 DNA 純化溶液 B（下面簡稱溶液B,，如果溶液 B 在低溫放置產(chǎn)生沉淀,，須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和顛倒 4-6 次混勻,， 藍色將變得均勻并且溶液將變得粘稠,。注意：千萬不要劇烈振蕩，否則基因組DNA 斷裂產(chǎn)生的片段非常容易污染質(zhì)粒 DNA,。

6.冰上放置不超過 5 分鐘,。注意：冰上放置不要超過 5 分鐘，否則質(zhì)粒 DNA 會有堿損傷,。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放,，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸,，中和溶液 B 中的堿,，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍色,，則表示變質(zhì),，應該棄之不用并且跟廠家聯(lián)系。

7.加入 350 ?L 冰上預冷的質(zhì)粒 DNA 純化溶液 C（下面簡稱溶液C）,，溫和反復顛倒 4-6 次,，溶液將變成無色,，將有白色絮狀沉淀產(chǎn)生。

8.冰上放置至少 5 分鐘讓質(zhì)粒 DNA 復性,。不能短于 5 分鐘,，一般 10 分鐘。

9.12,000×g 離心 3 分鐘,，小心將上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中,。由于此時的溶液比重較大，部分絮狀物懸浮在上清液中屬正?，F(xiàn)象,，吸取上清時避開這些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進行,，可減輕沉淀物漂浮,。

10.加入 0.6 mL 去蛋白溶液，充分震蕩 2 分鐘后常溫 12,，000×g 離心 2 分鐘,， 取水相（無色）到新離心管中，不要取有顏色的部分,。

11.加等體積的質(zhì)粒沉淀液,，顛倒 30 秒混勻后室溫 12,000×g 離心 10 分鐘，質(zhì)粒

DNA 將形成沉淀,，棄上清,。

12.加入 1 mL 的自備 75%乙醇，室溫 12,000×g 離心 1 分鐘,，棄上清,。

13.室溫 12,000×g 離心 1 分鐘，取出殘留液體（約 50 ?L）,。

14.室溫短暫放置半分鐘,。

15.加入 DNA 洗脫液 50-100 ?L 重懸沉淀，即得質(zhì)粒 DNA 溶液,，可以直接用于后續(xù)實驗,。

選擇我們的質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒（沉淀法），就是選擇精準,、高效,、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航,！