日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品簡介：

本產(chǎn)品是微量包涵體微量純化試劑盒的中量提取升級產(chǎn)品,，用于中量,，快速  的從大腸桿菌宿主細(xì)胞中提取高質(zhì)量的包涵體,。

產(chǎn)品特點：

1.中量提取,，一次可以處理 30-50 mL 的菌液,，一次中量提取相當(dāng)于 10-20 次微量提取,。

2.操作簡單快速,，整個過程只要四十分鐘左右。

3.本產(chǎn)品主要用于從大腸桿菌宿主中純化包涵體,，也能用于真菌和其他表達(dá)系統(tǒng)  但純化條件（主要是細(xì)胞裂解條件需要自行優(yōu)化）,。

4.能有效去除包涵體中的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜等非重組蛋白成份，使重組蛋白所占比重達(dá)到 60%以上,。

5.本手冊提供通過酶法裂解細(xì)胞和打斷 DNA 的方案,，反應(yīng)更加溫和。

6.得到的包涵體可以用于重折疊。

7.中量包涵體純化試劑盒足夠 5 次中量純化,，每次可以處理 30-50mL 菌液,。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

保存和運輸

常溫運輸及保存,，但溶菌-酶和 Benzonase 需要低溫運輸,，-20℃保存，有效期一年,。

自備試劑

無

使用方法：

準(zhǔn)備工作：

一次中量提取需要 5 mL 包涵體純化溶液 A,，用前按每 mL 加入 120mg 溶菌-酶的比例加入所需量的溶菌-酶干粉并搖晃溶解待用。溶菌-酶的溶液非常容易衰變,，  所以最好現(xiàn)配現(xiàn)用,，沒用完的只能在-20℃放一周。包涵體中的重組蛋白一般比溶解  狀態(tài)中的蛋白質(zhì)更能夠抵抗微量內(nèi)源性蛋白水解酶的降解,，如果實驗發(fā)現(xiàn)得到的重  組蛋白確有降解,，則需要在包涵體純化溶液 A 中新鮮加入自備的蛋白酶抑制劑混合物。

一．細(xì)胞裂解和包涵體的純化：

1.在蛋白誘導(dǎo)期結(jié)束時,，轉(zhuǎn)移 30=50 mL 菌液到一個干凈的塑料離心管中,。

2.7,000 rpm 室溫離心 3 分鐘，小心棄上清,。

3.加入 5 mL 含 120mg/mL 溶菌-酶的包涵體純化溶液 A 重懸細(xì)胞,。

4.室溫放置 10-20 分鐘裂解細(xì)菌，其間可以用手輕彈離心管混勻,。

5.-20℃冷凍至凝固,，一般需要 1 小時。凝固有利于裂解細(xì)菌,，所以一定要凝固到細(xì)菌溶液變成固體,。

6.室溫水浴解凍。如果裂解充分,，細(xì)菌釋放出的 DNA 將使裂解物十分粘稠,。如果不粘稠，說明裂解不充分,，需要重復(fù)凍融步驟,，否則完整細(xì)菌將和包涵體一  起沉淀，影響包涵體的純度,。最好在顯微鏡下檢查細(xì)菌是否充分裂解,。

7.加入 25 uL 的 Benzonase （1U/uL），脫色搖床上搖晃直到裂解液不再粘稠,，一般需要 30 分鐘左右（檢查方式是將裂解物傾倒轉(zhuǎn)移到另一離心管中,，在轉(zhuǎn)移過程中看其是否粘稠）,。

8.5,000-7,000 rpm 4℃離心 5 分鐘，小心收集上清,。上清含有以可溶形式存在的重組蛋白,，可以保留作為 SDS-PAGE 對照樣品。

9.將沉淀（主要由包涵體構(gòu)成）懸浮在 25 mL 的包涵體純化溶液 B 中,，輕柔混勻后室溫放置 5 分鐘,。

10.5,000-7,000 rpm 4℃離心 10 分鐘，小心收集上清,可以作為包涵體第一次洗滌的對照樣品,。

11.將沉淀（主要由包涵體構(gòu)成）懸浮在 25mL 的包涵體純化溶液 B 中,，輕柔混勻后室溫放置 5 分鐘。

12.5,000-7,000 rpm 4℃離心 10 分鐘,，小心收集上清作為包涵體第二次洗滌的對照樣品,。一般洗滌兩次就能夠得到足夠純凈的包涵體，如果需要更多洗滌,，需要用戶單獨購買包涵體洗滌液（包涵體純化溶液 B）,。

13.得到的沉淀即為包涵體，可以長期放置在冰箱待用或直接進(jìn)入包涵體的溶解步  驟,。

二．包涵體的溶解

14.在包涵體沉淀中加入 5 mL 包涵體溶解液,，用槍頭充分吹打后漩渦震蕩。如果低溫放置,，包涵體溶解液會產(chǎn)生沉淀,，必須 45-65℃溶化并混勻后才能使用。

15.室溫放置 1 小時使蛋白質(zhì)充分溶解,。

16.20000g 4℃離心 20 分鐘,，小心收集上清，保留不溶性沉淀,。注意：檢查離心管能否承受此離心力,。脫鹽處理上清后進(jìn)行 SDS-PAGE 檢查是否大部分重組蛋白都在上清中。如果沒有,，說明包涵體沒有完-全溶解，需要用適當(dāng)增加包涵體溶解液的用量,。注意：包涵體溶解液含 6M 鹽酸胍,，溶解蛋白能力強于含 8M 尿素的溶解液，但 SDS-PAGE 時不能直接上樣,，需要先脫鹽,。客戶也可以用自備尿素配制 8-10 M 尿素的溶液（尿素溶液不穩(wěn)定,，所以不能長期放置）溶解包涵體,，得到的溶解液可以直接用于 SDS-PAGE 電泳,。但其溶解能力弱于鹽酸胍。

17.  得到的脫氧后的蛋白質(zhì)溶液可以用于復(fù)性等試驗,。由于不同的蛋白質(zhì)有不同的優(yōu)良復(fù)性條件,，所以本公司不能提供統(tǒng)一的復(fù)性溶液，需要用戶自己摸索,。注  意：包涵體純化過程中引入了溶菌-酶,、核酸酶 Benzonase 等外源蛋白質(zhì)，在

SDS-PAGE 分析時可能有額外條帶出現(xiàn),。

選擇我們的中量包涵體純化試劑盒,，就是選擇精準(zhǔn)、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護(hù)航！