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產(chǎn)品簡介：

瓊脂糖凝膠 DNA 回收試劑盒（過柱法）用于從瓊脂糖凝膠中或DNA反應(yīng)體系中高效快速回收DNA片段,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.高效,，回收效率-最-高可達(dá)90%（跟片段大小和膠濃度等因素有關(guān)）,。

2.快速,，整個(gè)過程只需要十余分鐘,。

3.洗柱液不需要額外加乙醇,。

4.兩用，既可用于瓊脂糖膠回收,，也可以用于PCR或其他酶反應(yīng)回收,。

5.范圍廣，回收DNA的長度范圍為50 bp-40 Kb（但效率各不相同）,。

6.最大吸附量為10ug,。

7.回收的DNA可直接用于酶切、連接,、PCR,、測序等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

8.本試劑盒足夠純化50片含DNA的瓊脂糖凝膠條（每片膠條重量不超過250mg）,，足夠純化50次酶反應(yīng)（包括PCR反應(yīng),，每次體積不超過250uL）。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運(yùn)輸

常溫運(yùn)輸及保存,，有效期為一年,。由于通用溶膠液是高鹽溶液，因此在低溫時(shí)容易產(chǎn)生沉淀,。如果產(chǎn)生沉淀,，需要 60℃加熱溶解后才可以使用,。

自備試劑

異丙醇。

使用方法：

1.用自備的干凈刀片切取含 DNA 片段的瓊脂糖凝膠（100 mg 左右,，盡可能多地把多余的膠切除,，否則會(huì)影響回收效率），放入一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中稱重,，按重量比為 1：2 的比例加入通用溶膠液 (0.1 g 的瓊脂糖凝膠需要加入 0.2mL 的通用溶膠液),。如果瓊脂糖凝膠的濃度大于 2%，則需要按 1：3 的比例加入通用溶膠液,。

2.50℃保溫 10 分鐘使膠完-全溶化,，每隔 2-3 分鐘振蕩數(shù)次以促進(jìn)瓊脂糖凝膠的溶化。如果片段長度在 300bp 以下,，建議不要 50℃保溫,，而是延長溶膠時(shí)間，以免 DNA 變性,，影響回收率,。

3.在等待期間，活化離心吸附柱,。在離心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液,，套上收集管后室溫放置 2 分鐘，然后 12,000 rpm 離心 2 分鐘,，倒棄穿透液,，再將吸附柱套上收集管后待用?；罨蟮碾x心吸附柱必須在當(dāng)天使用,。

4.在上柱前，在溶化的膠中加入相當(dāng)于膠塊體積 1/2 的異丙醇（對(duì) 100mg 膠塊,， 加 50uL）,，快速振蕩 10 秒混勻。

5.將溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,，套上收集管,，靜置 3 分鐘。注意：靜置有助于DNA 與離心吸附柱的硅膠膜結(jié)合,。本產(chǎn)品提供的離心吸附柱的最大上樣體積為 0.8mL,，若溶膠液的總體積大于 0.8mL，一次加不完,，可以分多次將溶液加入到吸附柱中,。

6.12000-15000 g 室溫離心 1 分鐘，倒掉收集管中的穿透液。

7.加入 0.7mL 通用洗柱液于離心柱中,，12000-15000 g 離心 1 分鐘,，倒棄收集管中的廢液。如果回收的 DNA 用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)（如平末端連接或直接測序）,建議加入通用洗柱液后靜置 2-5 分鐘再離心,。

8.12000-15000 g 離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體,。

9.將離心柱吸附置于一新的干凈的塑料離心管中，加入 50 uL DNA 洗脫液于離心吸附柱硅膠膜的中央,。注意：如果回收的 DNA 用于測序,，則可用重蒸水洗脫DNA。DNA 洗脫液可以也用 TE 替代,，但用水或 TE 替代 DNA 洗脫液時(shí)，回收率可能稍有降低,。

10.  靜置 3 分鐘后 12000-15000 g 離心 1 分鐘,。

11.離心管底部所得溶液即為純化的 DNA 溶液，可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者放-20℃ 長期保存,。如果將所得 DNA 溶液再次加回到離心吸附柱中,，重復(fù)洗脫過程， 將得到更多的 DNA,。

12.用電泳方法或測 OD 方法確定回收所得 DNA 的濃度,。如果 DNA 濃度低，也可能低于測 OD 的分光光度計(jì)的檢測極限之下,，此種情況下就不能用此法,。

注意事項(xiàng)：

1.通用洗柱液含有容易揮發(fā)物質(zhì)，使用后一定要擰緊瓶蓋,，密閉保存,。

2.瓊脂糖凝膠體積的大小與回收率成反比關(guān)系，即體積越大,，越不利于回收,，一  次膠回收以使用 100 mg 瓊脂糖凝膠為宜。

3.如果在 5-10 分鐘內(nèi)凝膠溶化不完-全,，可以適當(dāng)?shù)难娱L水浴時(shí)間以使膠充分溶化,，否則 DNA 包裹在瓊脂糖凝膠中，影響 DNA 的回收效率,。

4.膠溶化后的液體轉(zhuǎn)移到離心柱后,，可以延長靜置時(shí)間使 DNA 與膜充分結(jié)合， 提高回收效率,。

5.洗脫 DNA 前的空甩很重要,，其目的是去除膜上殘留酒精，否則殘留酒精會(huì)影響后續(xù) DNA 反應(yīng)。

6.增大 DNA 洗脫液使用量有利于回收,，但要注意實(shí)際上樣量與最終回收體積的關(guān)系,，以便于計(jì)算回收率。DNA 洗脫液可以用 TE 或水替代,，但回收率稍有降低,。

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