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產(chǎn)品簡介：

對 dsDNA 進行準確定量是很多重要的分子生物學實驗的前提,。不同的定量方法有不同的線性范圍和檢測靈敏度，對干擾的屏蔽能力也各不相同,。其中,， OD260 測定法操作最-簡單,，但靈敏度只有 5 μg/mL,，不能屏蔽單鏈 DNA,、RNA 和核苷酸的干擾。為此本公司開發(fā)了基于 Hoechst 33258 熒光染料的 dsDNA 定量產(chǎn)品,。

產(chǎn)品特點：

1.即開即用,，用戶不需要單獨摸索最佳條件。

2.操作簡單,，只需要將 Hoechst 33258 工作液與待測樣品混合即可,。

3.徹-底屏蔽 RNA 的干擾，同樣濃度 RNA 產(chǎn)生的熒光不超過 DNA 的 1%,，尤其適用于直接用細胞裂解液測定 DNA 濃度（此時有大量RNA 存在）。

4.能部分屏蔽單鏈 DNA 的干擾,。Hoechst 33258 熒光染料與單鏈 DNA 結(jié)合時發(fā)出的熒光并不會與單鏈DNA 濃度成比例,。

5.需要激發(fā)波長為 365 nm，發(fā)射波長為 458 nm 的熒光儀,。

6.可選用比色皿檢測模式,，也可選用多孔板檢測模式。

7.靈敏度比 OD260 測定法高 500 倍，為 10 ng/mL,。

8.線性范圍為 10 ng/mL-10 μg/mL（相當于 10 pg/μL-10 ng/μL）,。

9.Hoechst 33258 染料對dsDNA 具有高度選擇性，主要識別AT 區(qū),。

10.提供dsDNA 定量對照,，用于制備標準曲線。dsDNA 定量對照AT 含量為 59%,。

11.本產(chǎn)品足夠 100 次 100 μL 體系的測定,，每次用 10 μL 樣品。

12.DNA 濃度測定試劑盒（Hoechst 33258 法）只能用于科研,。

產(chǎn)品參數(shù)：

規(guī)格及成分

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存,，有效期半年,。

自備試劑

超純水，能檢測激發(fā)波長為 365 nm,，發(fā)射波長為 458 nm 的熒光儀,。

使用方法：

1.將 DNA 標準品用 Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液稀釋成 1 mg/mL，此為工作液,，放冰上待用,。

2.打開儀器預熱 10-15 分鐘。

3.用超純水將 20×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液稀釋到 1×,，用多少稀釋多少,。

4.用 1×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液將本試劑盒提供的dsDNA 定量對照梯度稀釋成 1 mg/mL、100 μg/mL,、10 μg/mL,、1 μg/mL、100 ng/mL,、10 ng/mL共六個濃度,，各取 100 μL 到離心管中放常溫待用。

5.取 1×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液 100 μL 到離心管中作為空白對照,。

6.對 N 個待測樣本,，如果是待測 DNA 溶液，則取 10-100 μL 到離心管中,，補 1×Hoechst 33258-DNA 結(jié)合液到總體積為 100 μL,；如果是細胞裂解液，則稀釋細胞裂解液使其 SDS 的濃度不超過 0.02%,。如果超過此濃度,，將在下步會降低熒光讀數(shù)。

7.在上述 6+1+N 個離心管中各加 100 μL Hoechst 33258 染液，充分震蕩混合,。

8.40℃放置 20 分鐘,。

9.測定 458 nm 光吸收（激發(fā)波長為 365 nm）。

10.所有光吸收數(shù)值減去空白對照數(shù)值,，然后根據(jù)此數(shù)值制作標準曲線,，再用 N 各樣本的數(shù)值從標準曲線中推出檢測管中樣本的 DNA 濃度，再根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出稀釋前樣本中 DNA 的濃度,。

選擇我們的DNA 濃度測定試劑盒（Hoechst 33258 法）,，就是選擇精準、高效,、可靠的檢測方案,，為您的科研實驗保駕護航！