目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>凍干粉>> 隨機(jī)引物凍干粉（10 堿基、無-修飾）
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更新時(shí)間：2025-04-17 10:06:51瀏覽次數(shù)：62評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5ug |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | XY-D-1574 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | 10 Bases Random Primer |
| 保存條件 | 常溫 | 有效期 | 12個(gè)月 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
隨機(jī)引物凍干粉（10 堿基,、無-修飾）是 10 堿基、無-修飾隨機(jī)引物的干粉,，用于逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和隨機(jī)引物標(biāo)記,。本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床,。
產(chǎn)品參數(shù)：
規(guī)格及成分
| 成分 | 規(guī)格 | 包裝 |
隨機(jī)引物凍干粉 （10 堿基,，無-修飾） | 5ug | 0.5mL 本色管 |
| 使用手冊(cè) | 1份 | 無 |
保存和運(yùn)輸
常溫運(yùn)輸，低溫保存,，有效期一年,。
自備試劑
超純水。
使用方法：
一,、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
1.在隨機(jī)引物 (10 堿基,，無-修飾) 干粉管中加入 25 uL 自備的超純水,，渦旋震蕩半分鐘混勻，得到 0.2 ug/uL 的 10 堿基隨機(jī)引物溶液（ -20℃保存,，下同）,。
2.在一干凈的反應(yīng)管中加入自備的 RNA 模板。注意：RNA 模板不能含有基因組DNA 污染,。
RNA 模板種類加入量
總 RNA100-500 ng
或 poly(A) mRNA10-500 ng
或?qū)Ｒ坏?RNA0.01 pg-500 ng
3.加入引物和水
4.加水到 13 uL。
5.70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴,，此步可以打開 RNA 的二級(jí)結(jié)構(gòu),。
6.再加入 5 uL 4×RT Buffer（含 dNTP）。
7.37℃保溫 5 分鐘,。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板,，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。但如果使用隨機(jī)引物,，由于其很短,，則改成 25℃ 5 分鐘以便其跟RNA 結(jié)合。
8.加入 1 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI）,，反應(yīng)終體積為 20 uL,。
9.42℃保溫 60 分鐘。但如果使用隨機(jī)引物,，需要先 25℃保溫 10 分鐘,，待合成了一段 cDNA 后，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘,。此步為 RT 反應(yīng),。
10.70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用,。合成的 cDNA 可以直接作為PCR 模板使用,，不需要純化。
二,、隨機(jī)引物標(biāo)記
11.需要在隨機(jī)引物 (10 堿基,，無-修飾) 干粉管中加入 12.5 ?L 自備超純水，渦旋震蕩 30 秒,，短暫離心 10 秒,。得到 0.4 ug/uL 的 10 堿基隨機(jī)引物溶液，放冰上待用,。
12.在一干凈的塑料離心管中加入下列成分：
成分用量
模板 DNA
（PCR 回收片段,，長(zhǎng)度 100-1000 bp）50-150 ng
5×隨機(jī)引物地高-辛標(biāo)記反應(yīng)液4 uL
0.4 ?g/uL 的 10 堿基隨機(jī)引物溶液4 uL
超純水補(bǔ)水到 19 uL
13.PCR 儀上 100℃加熱 10 分鐘使模板 DNA 徹-底變性。
14.立即放冰上待用,。不能緩慢降溫,，否則變性的模板DNA 單鏈又會(huì)雜交形成雙鏈,。
15.離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
16.加入 1 uL Klenow exo DNA 聚合酶,，輕柔吹打混勻,。此時(shí)反應(yīng)總體積為 20uL。
17.37℃保溫 1-20 小時(shí),。標(biāo)記效率跟模板 DNA 和保溫時(shí)間相關(guān),，模板越多，新合成探針多,，但新合成探針/模板比例低,，雜交信號(hào)低。模板越少,，新合成探針少,，但探針/模板比例高，雜交信號(hào)高,。但探針少到一定程度,，也不會(huì)有雜交反應(yīng)發(fā)生。因此用戶需要探針合成量和雜交信號(hào)強(qiáng)弱在這兩者之間進(jìn)行折衷選擇,。
18.反應(yīng)結(jié)束后加熱 100℃ 5 分鐘使 DNA 聚合酶變性,，同時(shí)使 DNA 探針變性成單鏈。變性后的標(biāo)記反應(yīng)液可以放-20℃長(zhǎng)期保存,，也可以直接將變性后的探針加入到雜交反應(yīng)液中進(jìn)行雜交,。如果電泳檢測(cè)，標(biāo)記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài),。
隨機(jī)引物凍干粉（6 堿基,、無-修飾）
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