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CFDA SE 的關(guān)鍵特性與作用機(jī)制

CFDA SE 是一種功能強(qiáng)大的細(xì)胞示蹤染料，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖研究,。它通過被動運(yùn)輸進(jìn)入活細(xì)胞,，被胞內(nèi)酯酶轉(zhuǎn)化為熒光 CFSE，發(fā)出明亮綠光,。CFSE 與細(xì)胞蛋白結(jié)合后穩(wěn)定保留,，隨細(xì)胞分裂熒光均分，熒光強(qiáng)度減半,，可用于識別不同分裂代次細(xì)胞,。CFDA SE 標(biāo)記非分裂細(xì)胞熒光穩(wěn)定，可持續(xù)數(shù)月,，非常適合細(xì)胞群落分析,。其熒光均一性優(yōu)于 PKH26，分裂后子代細(xì)胞熒光分配均衡,，且能檢測多達(dá)八次甚至更多細(xì)胞分裂,。

操作步驟詳解

細(xì)胞準(zhǔn)備與處理

• 細(xì)胞選擇與培養(yǎng) ：依據(jù)研究目的挑選合適的細(xì)胞系，確保細(xì)胞狀態(tài)良好,，生長處于對數(shù)生長期,，在相應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)并定期換液。

• 細(xì)胞計數(shù)與濃度調(diào)整 ：準(zhǔn)確計數(shù)細(xì)胞后,，調(diào)整濃度至實驗所需范圍,，如

  $1 \times 10^5$

  -

  $5 \times 10^6$

  個 / mL，以保證標(biāo)記效果和后續(xù)實驗準(zhǔn)確性,。

CFDA SE 染料準(zhǔn)備

• 染料配制 ：按試劑盒說明,，將 CFDA SE 溶于無血清培養(yǎng)基或適當(dāng)緩沖液，配制成工作液,，濃度一般為 1 - 10 μM,。根據(jù)細(xì)胞類型和實驗需求優(yōu)化濃度，避免濃度過高或過低影響標(biāo)記效果,。

• 染料預(yù)熱 ：將配制好的染料工作液置于 37℃水浴中預(yù)熱 5 - 10 分鐘,，以促進(jìn)染料更好地穿透細(xì)胞膜，提高標(biāo)記效率,。

細(xì)胞標(biāo)記過程

• 細(xì)胞與染料混合 ：將預(yù)熱后的 CFDA SE 工作液與細(xì)胞懸液按一定比例混合,，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞與染料充分接觸,。通常 CFDA SE 與細(xì)胞的混合比例為 1:1 或根據(jù)實驗需求調(diào)整,。

• 標(biāo)記孵育 ：將混合好的細(xì)胞與染料置于 37℃、5% CO? 的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育 10 - 20 分鐘,，使 CFDA SE 充分進(jìn)入細(xì)胞并被酯酶轉(zhuǎn)化為 CFSE,。孵育時間不宜過長,，以免細(xì)胞因缺氧等原因提前凋亡或影響后續(xù)實驗。

細(xì)胞洗滌與后續(xù)培養(yǎng)

• 洗滌去除未結(jié)合染料 ：孵育結(jié)束后,，用預(yù)冷的含有血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞 2 - 3 次,，以去除未結(jié)合的 CFDA SE 染料。洗滌過程中動作要輕柔,，避免細(xì)胞聚集或損傷,。

• 細(xì)胞重懸與培養(yǎng) ：將洗滌后的細(xì)胞重懸于適量的培養(yǎng)基中，調(diào)整細(xì)胞濃度至合適范圍,，進(jìn)行后續(xù)實驗,，如細(xì)胞增殖實驗或細(xì)胞移植實驗等。

結(jié)果檢測與分析

流式細(xì)胞儀檢測

• 儀器設(shè)置與參數(shù)調(diào)整 ：使用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞熒光強(qiáng)度,，設(shè)置激發(fā)波長為 488 nm,，檢測綠色熒光（FL1 通道）。根據(jù)細(xì)胞熒光強(qiáng)度的不同,，區(qū)分未分裂細(xì)胞和不同分裂代次的細(xì)胞,。

• 數(shù)據(jù)采集與分析 ：采集熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)，通過流式細(xì)胞儀軟件進(jìn)行分析,。根據(jù)熒光強(qiáng)度的分布,，計算不同分裂代次細(xì)胞的比例，從而評估細(xì)胞的增殖情況,。通常,，未分裂細(xì)胞具有最高的熒光強(qiáng)度，每分裂一次熒光強(qiáng)度減半,。

熒光顯微鏡觀察

• 顯微鏡設(shè)置與觀察 ：在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞的熒光標(biāo)記情況,，使用激發(fā)波長為 488 - 500 nm 的藍(lán)光激發(fā)細(xì)胞，觀察細(xì)胞內(nèi)綠色熒光的分布和強(qiáng)度,。

• 圖像拍攝與記錄 ：拍攝細(xì)胞熒光圖像,，記錄細(xì)胞的標(biāo)記效果和增殖情況。通過圖像分析軟件對熒光強(qiáng)度進(jìn)行半定量分析,，進(jìn)一步評估細(xì)胞增殖程度,。