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在哺乳動物細胞培養(yǎng)領(lǐng)域，RPMI-1640 培養(yǎng)基以其性能和廣泛的適用性脫穎而出,。本文將深入探討 RPMI-1640 培養(yǎng)基的配方,、應(yīng)用以及操作使用要點。

一,、RPMI-1640 培養(yǎng)基的配方與特點

RPMI-1640 是由 Moore 等人于 1967 年在 Roswell Park Memorial Institute 開發(fā)的細胞培養(yǎng)基,，是改進型的 McCoy's 5A 培養(yǎng)基，使用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng),。RPMI-1640 培養(yǎng)基在基礎(chǔ)成分上添加了 10% 胎牛血清和 1% 雙抗（青霉素 - 鏈霉素溶液）,。這種配方為細胞提供了全面的營養(yǎng)支持和保護。

即用型配方

RPMI-1640 培養(yǎng)基（含 10% 血清,，1% 雙抗）經(jīng)過精心配制,，無需額外添加成分，開瓶即可直接用于細胞培養(yǎng),。這種即用型設(shè)計大大簡化了實驗前的準備工作,，減少了因配制培養(yǎng)基帶來的誤差和污染風險。特別適合那些對時間敏感的實驗和需要快速啟動培養(yǎng)的場景,。

營養(yǎng)全面

RPMI-1640 培養(yǎng)基本身含有豐富的營養(yǎng)成分,，包括各種氨基酸、維生素,、礦物質(zhì)和葡萄糖,。10% 胎牛血清的添加進一步豐富了培養(yǎng)基中的生長因子和細胞黏附因子，支持細胞的快速增殖和健康生長,。1% 雙抗成分則有效抑制細菌和真菌的生長,，降低培養(yǎng)過程中的污染風險。

二、RPMI-1640 培養(yǎng)基的應(yīng)用范圍

廣泛適用于多種細胞類型

RPMI-1640 培養(yǎng)基適用于多種哺乳動物細胞的培養(yǎng),，包括 Jurkat,、MCF-7、PC-12,、PBMC,、星型膠質(zhì)細胞和腫瘤細胞等。它尤其適用于懸浮細胞的培養(yǎng),，為這些細胞提供了理想的生長環(huán)境,，促進細胞的旺盛生長和穩(wěn)定傳代。

滿足多種研究和生產(chǎn)需求

在生物醫(yī)學研究中,，RPMI-1640 培養(yǎng)基被廣泛用于細胞的長期培養(yǎng),、基因轉(zhuǎn)染、藥物篩選等實驗,。在生物制藥領(lǐng)域,，它為重組蛋白表達和疫苗生產(chǎn)提供了穩(wěn)定的培養(yǎng)平臺。

三,、RPMI-1640 培養(yǎng)基的操作使用方法

儲存與準備

RPMI-1640 培養(yǎng)基應(yīng)保存在 4℃左右的低溫環(huán)境中，避免光照直射和溫度波動過大,。在使用前,，將培養(yǎng)基從冰箱中取出，使其恢復(fù)至室溫,，以確保細胞在接種時不會因溫度驟變而受到應(yīng)激,。

細胞培養(yǎng)步驟

1. 細胞接種：根據(jù)細胞類型和實驗需求，將細胞以適當?shù)拿芏冉臃N到培養(yǎng)容器中,。對于貼壁細胞,，可以使用培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板,；對于懸浮細胞,，通常使用搖瓶或懸浮培養(yǎng)袋。

2. 培養(yǎng)條件：將接種后的細胞放入細胞培養(yǎng)箱中,，設(shè)置溫度為 37℃,，濕度保持在 95% 以上，二氧化碳濃度為 5% 左右,。這些條件有助于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定,，為細胞提供一個適宜的生長環(huán)境。

3. 定期換液：根據(jù)細胞的生長速度和代謝需求,，定期更換培養(yǎng)基,，一般每 2 - 3 天更換一次。換液時，吸出舊的培養(yǎng)基,，用適量的 PBS 或無菌生理鹽水輕輕沖洗細胞,，再加入新鮮的 RPMI-1640 培養(yǎng)基。

4. 觀察與記錄：在細胞培養(yǎng)過程中,，定期使用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)和生長狀態(tài),，記錄細胞的生長曲線和分裂情況。注意觀察細胞的貼壁情況,、細胞密度和細胞形態(tài)是否正常,。

凍存與復(fù)蘇

當細胞生長達到實驗要求的密度或狀態(tài)時，可以進行凍存,。凍存時,，使用含 10% DMSO 的凍存培養(yǎng)基，將細胞懸浮液分裝到凍存管中,，放入程序降溫盒中逐步降溫,，最終保存于液氮罐中。復(fù)蘇時,，將凍存管從液氮中取出,，迅速放入 37℃水浴中快速解凍，然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器中,，加入新鮮的 RPMI-1640 培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng)。

傳代操作

對于貼壁細胞,，當細胞生長達到 80% - 90% 匯合度時,，可以使用胰蛋白酶進行消化，按照適當?shù)谋壤M行傳代,。對于懸浮細胞,，直接稀釋細胞懸液進行傳代。傳代比例根據(jù)細胞類型和實驗需求確定,，一般為 1:2 - 1:10,。

四、RPMI-1640 培養(yǎng)基的優(yōu)勢與注意事項

優(yōu)勢

• 廣泛適用性：適用于多種哺乳動物細胞培養(yǎng),，特別是懸浮細胞,。

• 營養(yǎng)全面：含有豐富的營養(yǎng)成分和生長因子，支持細胞的快速增殖和健康生長,。

• 即用型配方：無需額外添加成分,，開瓶即用，節(jié)省時間,，減少污染風險,。

• 成本效益：提供多種成分組合的細胞培養(yǎng)基，滿足各類需求。

注意事項

• 儲存條件：嚴格控制儲存溫度和環(huán)境,，避免反復(fù)凍融,。

• 血清選擇：選擇高質(zhì)量的胎牛血清，以確保細胞生長和實驗結(jié)果的可靠性,。

• 定期評估：定期評估培養(yǎng)基的性能和細胞的生長狀態(tài),，必要時更換培養(yǎng)基或調(diào)整培養(yǎng)條件。