FlashPure sgRNA Purification Kit

高效 sgRNA 純化試劑盒

高效sgRNA純化試劑盒 T7體wai轉(zhuǎn)錄

目錄號:91614

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

本試劑盒是一款快速可靠的 sgRNA 專用的純化試劑盒,，可體wai轉(zhuǎn)錄（IVT）酶促反應(yīng)中純化多達(dá) 200 μg 濃縮的高質(zhì)量 RNA,。du特設(shè)計的微量 sgRNA 純化柱，可確保零緩沖液殘留,，無交叉污染,，洗脫體積低至 6μl。

在高鹽條件下,，RNA 與硅膠吸附膜高效,、專一地結(jié)合，經(jīng)過漂洗步驟,，最后 RNA 被 RNase-Free H2O洗脫下來,，最大限度地去除了不需要的 NTP、蛋白質(zhì),、無機(jī)鹽離子和許多有機(jī)雜質(zhì)等,，確保在 IVT/RNA 合成反應(yīng)后獲得高純度的 RNA 轉(zhuǎn)錄本。洗脫后的 RNA 可用于多種下游應(yīng)用,，包括 RT-PCR,、NGS、RNA 文庫制備,、Northern blot,、Formation of ribonucleoprotein (RNP) complexes for genome editing、顯微注射,、RNA標(biāo)記,、 RNA 干擾、轉(zhuǎn)染等下游實驗,。

本試劑盒不但可以純化 miRNA 等各種小的 RNA,，也可以純化大片段的 mRNA 等 RNA。還適用于從酶反應(yīng)液（如 DNase 處理,、體外轉(zhuǎn)錄,、RNA 加帽、蛋白酶處理,、RNA 標(biāo)記等）中純化回收 RNA,，也可用于從其它方式提取獲得的 RNA 的純化。

適用范圍

適用于回收≥15nt 的單鏈 RNA 或者雙鏈 RNA,。

產(chǎn)品特點

1. 快速：步驟少,，操作簡便，整個操作僅需 15 分鐘,。

2. 高效：du特配方使本產(chǎn)品比一般試劑盒回收效率大大提高,，并且不會抑制下游反應(yīng)。

注意事項

1. 使用前請檢查 Buffer MRC 是否出現(xiàn)渾濁,，如有混濁現(xiàn)象,，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清,。

2. 所有步驟均可以在室溫進(jìn)行,，但是應(yīng)該迅速操作，減少 RNA 降解機(jī)會,。

3. Wash Solution 1 和 Wash Solution 2/3 加入無水乙醇后,，可以在常溫保存。

4. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用幾天后出現(xiàn)沉淀晶體,，并不影響使用,，不吸晶體，直接吸上清使用就可以,。

操作步驟

提示：

第一次使用前請先在 Wash Solution 1 瓶和 Wash Solution 2/3 瓶中加入無水乙醇,，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽，并打?qū)礃?biāo)記,。

1. 于冰上,，用 RNase-Free H2O 將 RNA 樣品補(bǔ)足至 100 μl，加入 200 μl Buffer MRC,，輕柔混勻,。

2. 加入 375 μl （1.25 倍體積）無水乙醇，混勻,，無需離心,。

注意：如果希望回收大于 25nt 的 RNA，加 1.25 倍體積無水乙醇就可以,；

如果希望回收大于 15nt 的 RNA,，可以加 2 倍體積無水乙醇。

3. 將上一步所得溶液加入一套吸附柱中（吸附柱套在收集管內(nèi)）,，13,000 rpm 離心 30 sec,，棄濾液，將吸附柱重新套回收集管,。（吸附柱的最大容量是 700 ul,，溶液較多時,，可分兩次進(jìn)行）

4. 加入 700 μl Wash Solution 1（請先檢查是否已加入無水乙醇!），13,000 rpm 離心 30 sec,，棄濾液,。

5. 漂洗：加入 500ul Wash Solution 2/3，13,000 rpm 離心 30 sec,，棄濾液,。

6. 二次漂洗：重復(fù)步驟 5 一次。

7. 干燥：將離心吸附柱于 13,000 rpm 離心 2 min,，甩干殘留漂洗液,。

8. 洗脫：將吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附膜的中央懸空滴加 10 ~ 20 μl RNase-Free H2O,，室溫放置 2 min,，13,000 rpm 離心 1 min，收集 RNA 片段,。

注意：為增加回收效率,，可將 RNase-Free H₂O 在 80℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中,，室溫放置 2 min,，再次離心收集。

減少洗脫液（RNase-Free H₂O）的體積可以提高 RNA 濃度,，但是最di洗脫液體積不應(yīng)少于 6μl,。

高效sgRNA純化試劑盒 T7體wai轉(zhuǎn)錄