高效感受tai細(xì)胞制備試劑盒

高效感受tai細(xì)胞制備試劑盒 感受tai制備

目錄號(hào)：30018

試劑盒組成,、儲(chǔ)存,、穩(wěn)定性：

短期使用4℃，避免污染,。長(zhǎng)期保存－20℃一年有效,。

產(chǎn)品介紹：

1.   高效感受tai細(xì)胞制備試劑盒是在傳統(tǒng)高效感受tai細(xì)胞制備方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行適當(dāng)改良而成，操作便捷,，轉(zhuǎn)化效率高,。

2.   使用本試劑盒可以使感受tai效率達(dá)到10⁸ cfu/μg質(zhì)粒。對(duì)于小的質(zhì)粒效率略高,，而對(duì)于大的質(zhì)粒則效率略低一些,。用本試劑盒制備的高效感受tai細(xì)胞不僅可以轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，而且非常適合于轉(zhuǎn)化普通的連接產(chǎn)物,，特別適合于轉(zhuǎn)化平端連接等需要高轉(zhuǎn)化效率的情況,。

3.   使用本試劑盒操作簡(jiǎn)單，細(xì)菌培養(yǎng)好后僅需60分鐘左右即可完成高效感受tai細(xì)胞的制備,。

4.   本試劑盒適用于絕大部分常見的大腸桿菌,，包括Top 10、DH5α,、BL21（DE3）,、JM109、TG1,、HB101和XL-1等,。但是不同的菌種，轉(zhuǎn)化效率可能有很大差別,。

5.   本試劑盒可以分多次使用,，共可以制備100支100μl的感受tai細(xì)胞。

 注意事項(xiàng)：

1.          所有試劑,、耗材,、儀器、設(shè)備務(wù)必經(jīng)過滅菌處理,。

2.          在制備感受tai細(xì)胞的過程中均使用不含抗生素的LB,。在使用感受tai菌的過程中熱休克后的37℃培養(yǎng)時(shí)也必須使用無抗生素的LB，即便轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒是有抗性的,。

3.          感受tai細(xì)胞制備完畢請(qǐng)快速轉(zhuǎn)入-70℃,。

操作步驟：(實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng))

1.   涂平板： 

為取得最佳的感受tai效率，必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板,，并培養(yǎng)過夜,。 

2.   接種：

取一有新鮮培養(yǎng)的菌種的LB平板，后續(xù)操作均在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下,，并在酒精燈上略略燒一下,，使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個(gè)無菌的塑料槍頭或牙簽,，從平板上挑取一個(gè)單克隆,，然后把蘸有菌種的塑料槍頭或牙簽放到裝有3毫升SOB或者LB（客戶應(yīng)該根據(jù)菌種不同選擇適合的培養(yǎng)基）的細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)。上述操作也可以使用接種環(huán)等進(jìn)行操作,。 

3.   培養(yǎng)：

37℃約250rpm培養(yǎng)過夜,，通常培養(yǎng)時(shí)間控制在16小時(shí)左右為宜。絕對(duì)不宜超過18小時(shí),。 

4.   再接種培養(yǎng)：

根據(jù)需要制備的高效感受tai細(xì)胞的量,，按照1:500的比例用新鮮培養(yǎng)的過夜菌接種培養(yǎng)。例如取100微升的新鮮過夜菌到50毫升SOB或者LB中,，37℃約250rpm培養(yǎng),。

5.   制備感受tai細(xì)胞： 

e  注意：離心機(jī)轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間對(duì)于感受tai細(xì)胞制作非常重要，不同種類的細(xì)菌最佳的轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間不同,，應(yīng)該根據(jù)具體情況優(yōu)化,。最佳狀況是適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速和離心時(shí)間讓細(xì)菌剛好離心沉淀下來，又不能太緊密,，否則重懸困難,，只能用力吹打才能重懸，會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損害,，影響轉(zhuǎn)化效率,。

1)  在培養(yǎng)的細(xì)菌OD600達(dá)到0.5左右時(shí)，把培養(yǎng)的菌液置于冰浴中,，冷卻15分鐘,。注意：后續(xù)所有操作均須在4度或冰浴進(jìn)行。

2)   4℃（離心機(jī)必須預(yù)先冷卻）3000-3500g離心5分鐘收集細(xì)菌,，棄上清（盡量去除干凈上清,，殘留越少越好）。

3)  如果離心沉淀前的菌量為50毫升,，按后續(xù)操作進(jìn)行,，如果是其它體積則按比例換算后進(jìn)行后續(xù)操作。 

4)   用10毫升預(yù)冷的高效感受tai制備溶液A輕輕重懸細(xì)菌沉淀（為方便重懸,，可先加少量溶液A,，重懸后再加入剩余的溶液A），吹打重懸時(shí)一定要很輕柔,，否則會(huì)影響效果,。

5)  冰浴15分鐘,。 

6)   4℃（離心機(jī)必須預(yù)先冷卻） 3000-3500g離心5－7分鐘收集細(xì)菌，棄上清,。

7)   用2毫升預(yù)冷的高效感受tai制備溶液B輕輕重懸細(xì)菌沉淀,。吹打重懸時(shí)時(shí)一定要很輕柔,，否則會(huì)影響效果,。 

8)   冰浴15分鐘。 

9) 冰浴上進(jìn)行分裝,，可以根據(jù)需要適當(dāng)分裝成50-200微升/管,。 

10) 立即使用或用液氮或乙醇干冰浴速凍后-70℃保存。

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