2 x Universal SYBR Green qPCR Mix

2xUniversalSYBRGreenqPCRMix熒光定量

目錄號:71600

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存,，有效期 24 個月,。使用前,，充分融解，輕輕顛倒混勻,，短期使用可放在 4 ℃,，避免反復(fù)凍融。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

2× Universal SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,，為2x 預(yù)混液,，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟,，縮短加樣時間,，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶,，配合精心優(yōu)化的Buffer體系,，有效抑制非特異性擴增，可對寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量,，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果,，具有靈敏度高、特異性強,、穩(wěn)定性好等特點,。

預(yù)混液中含有通用型ROX，適用于所有qPCR儀,，使用qPCR Mix時不需要額外添加ROX來校正儀器,。

操作步驟：

1. 將DNA模板、引物,、2 x Universal SYBR Green qPCR Mix,、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）

注意：

1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系,，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%,，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同,，可對模板進(jìn)行梯度稀釋,，以確定最佳的模板使用量。

2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM,，就可以得到較好的結(jié)果,，反應(yīng)效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴增效率不高的情況下,，可提高引物濃度,；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度,，由此優(yōu)化反應(yīng)體系,。

3. qPCR反應(yīng)程序

注意：

1） 本產(chǎn)品兼容性強,，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說,，二步法擴增特異性高,，三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差,，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度,；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結(jié)果時,，可嘗試加長延伸時間或者進(jìn)行三步法PCR擴增,。

2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；

3） 延伸（退火&延伸）時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整,。

4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定,。

相關(guān)產(chǎn)品：

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