2x SYBR Green qPCR Mix（With 100x ROX）

2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量

目錄號(hào):71519

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存,，有效期 24 個(gè)月, 使用前充分融解，輕柔顛倒混勻,。短期使用可放在 4 ℃,，避免反復(fù)凍融,。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,，可減少操作步驟,，縮短加樣時(shí)間，降低污染幾率,。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶,，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增,，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量,，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果,，具有靈敏度高、特異性強(qiáng),、穩(wěn)定性好等特點(diǎn),。

快捷用法:

1. 需要高濃度ROX的機(jī)型（終濃度為0.5 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入25µl 100x ROX,，充分混勻后,，可以直接使用。

2. 需要低濃度ROX的機(jī)型（終濃度為0.05 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入2.5µl 100x ROX,，充分混勻后,，可以直接使用。

操作步驟：

1. 將DNA模板,、引物,、2 x SYBR Green qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用,。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）

注意：

1） 推薦模板加樣量為1-2 μl / 20μl反應(yīng)體系,，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10 - 100 ng,。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同,，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量,。

2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM,，就可以得到較好的結(jié)果，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整,。擴(kuò)增效率不高的情況下,，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),，可降低引物濃度,，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

3） 舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序,，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板,、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。

3. qPCR反應(yīng)程序

注意：

1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng),，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果,。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)

程序。一般來(lái)說(shuō),，二步法擴(kuò)增特異性高,，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差,，可以嘗試兩步法擴(kuò)增

或提高退火溫度,；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí),，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增,。

2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；

3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整,。

4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定,。

2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量