λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑he（離心柱型）

λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑he 核酸提取

目錄號：40212

適用范圍：

適用于快速λ噬菌體DNA

試劑盒組成,、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

儲存事項:

1.   在RNase A管和DNase I管分別加入1毫升的裂解緩沖液吹打,，顛倒混勻,，充分溶解RNase A和DNase I后,，   按照每次使用量分裝－20℃凍存，有效期6個月,。

2.   結(jié)合液LB低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

3.   避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化、pH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹：

λ噬菌體載體廣泛用于文庫篩選,，目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測序等后續(xù)工作。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清,，首先用RNase A /DNase I混合mei消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA,，沉淀收集噬菌體,，噬菌體被SDS裂解,，殘留碎片通過沉淀離心去除掉。裂解物上清中的λ噬菌體DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,，將鹽、細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,，zui后低鹽的洗脫緩沖液將λ噬菌體DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.        不需要使用有毒的苯fen等試劑,，也不需要乙chun沉淀等步驟,。

2.        節(jié)省時間，簡捷,，可用于液體培養(yǎng)裂解物和固體培養(yǎng)板的提取,，單個樣品操作一般可在1.5小時內(nèi)完成。

3.        產(chǎn)量高,，典型的產(chǎn)量10ml λ噬菌體裂解培養(yǎng)物上清可以提取約10µg λ噬菌體DNA,。

4.        多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.7～1.9,?？梢灾苯佑脕韒ei切和測序。

 注意事項：

1.        使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的冷凍離心機(jī),。

2.        開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到37℃?zhèn)溆谩?/span>

3.        需要自備lv仿,，20％SDS。

結(jié)合液LB含有刺激性化合物,，操作時要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚，眼睛和衣

4.        服,。若沾染皮膚,、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請先閱讀注意事項）

以10 ml噬菌體感染細(xì)菌培養(yǎng)上清提取舉例：

提示：

e  第一次使用前請先在漂洗液WB中加入zhi定量無水乙chun,，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙chun,，以免多次加入!

e  將噬菌體沉淀液放在冰上預(yù)冷,。

1.        將0.5%lv仿處理后的λ噬菌體感染的液體培養(yǎng)物10,000g（約12,000rpm） 4℃離心10分鐘去除細(xì)胞碎片和殘渣,。

轉(zhuǎn)速不能過高，時間不能過長,，否則噬菌體可能和碎片一起沉淀,，降低產(chǎn)量。

2.        取10ml上清,，加入20μl RNase和20μl DNase充分混勻37℃溫育30分鐘,。

每個噬菌體培養(yǎng)上清因生長和裂解情況不同而殘留RNA/DNA量不等。RNase/DNase消化過頭,，可能減少產(chǎn)量,；消化不wan全，可能未消化的DNA/RNA和細(xì)胞碎片粘去部分噬菌體減低產(chǎn)量并/或者導(dǎo)致zui后污染宿主菌DNA,，因此應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)節(jié)用量和消化時間,。

3.        加入2 ml 冰預(yù)冷的噬菌體沉淀液，輕柔充分混勻后置冰上冷卻（培養(yǎng)板裂解物必須在冰上放置30分鐘）,。

4.        10,000g（12,000rpm）4℃離心10分鐘,，棄上清，干燥1分鐘,。沉淀下來的噬菌體外觀為透亮或者稍白的沉淀,。

5.        加入500μl裂解緩沖液，吹打重懸噬菌體,，加入100μl 20％SDS,，立即輕柔顛倒混勻4-6次后，70℃溫育10分鐘,，然后置冰上冷卻,。

6.        加入100μl雜質(zhì)沉淀液，立即輕柔顛倒混勻4-6次,，zui高速13,000g 4℃離心10分鐘,。

7.        仔細(xì)將上清轉(zhuǎn)入新的離心管，加入350μl結(jié)合液LB,，輕柔渦旋混勻,。

8.        將上述混合物加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm離心30秒,，倒掉收集管中的廢液,。

吸附柱一次zui多只可以容納大約700μl混合物，因此需要分次把混合物上到吸附柱內(nèi),，重復(fù)步驟8,。

9.        加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙chun!），12,000rpm 離心30秒，棄廢液,。

10.     可選步驟：重復(fù)步驟9一遍,。

11.     將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘,，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

12.     取出吸附柱AC,，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 50℃水浴中預(yù)熱）， 室溫放置1分鐘,，12,000rpm 離心1分鐘,。如果想得到較多量的DNA,，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，12,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高,，如果需要DNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積,， 但是zui小體積不應(yīng)少于40μl,，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產(chǎn)量,。

13.     DNA可以存放在2-8℃,，如果要長時間存放，可以放置在-20℃,。

v  問題與解決方法:

λ噬菌體基因組DNA快速提取試劑he 核酸提取