HiPure Plasmid Mini Kit

高純度質(zhì)粒小量快速提試劑盒

高純度質(zhì)粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取

目錄號：31013

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存條件：

在室溫(15 ~ 25℃)干燥條件下，可保存 12 個(gè)月,。加入 RNase A 后的溶液 P1 應(yīng)置于 2 ~ 8℃保存,，可穩(wěn)定保存 6 個(gè)月,如果 P1 中 RNase A 失活，重新補(bǔ)加即可,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介：

本試劑盒用于高純度質(zhì)粒 DNA 的小量制備,。菌體經(jīng)堿裂解、高鹽,、低 pH 處理,，質(zhì)粒可從菌體中釋放出來，并特異,、高效地被離心吸附柱吸附,。通過清洗液的洗滌可去除雜質(zhì)，在低鹽,、高 pH 條件下洗脫,，最后得到純度較高的質(zhì)粒 DNA。所得質(zhì)?？芍苯佑糜趍ei切,、轉(zhuǎn)化、PCR,、RT-qPCR,、測序及轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.得率高：1.5 - 4.5ml 可提出多達(dá) 10 – 20 ug 的純凈質(zhì)粒；

2.純度高：沉淀致密,，去雜質(zhì)che底干凈,；

3.高效：操作簡便，快捷,，節(jié)約時(shí)間,。

注意事項(xiàng)：

1.         使用前請先檢查平衡液、溶液 P2 和溶液P3 是否出現(xiàn)渾濁,，如有混濁現(xiàn)象,，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清,。

2.        細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間一般為 12 ~ 16 小時(shí),，過度培養(yǎng)會降低質(zhì)粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 突變；

3.         注意溶液 P1,，P2 和 P3 的用量比例,，若細(xì)菌量增大，需按比例放大這些溶液的使用量,；

4.        隨菌體增多應(yīng)延長溶液 P2 的作用時(shí)間,，直至溶液成粘稠透明狀，但時(shí)間過長會導(dǎo)致質(zhì)粒DNA變性,。

5.        質(zhì)粒的產(chǎn)量跟細(xì)菌量,、質(zhì)粒拷貝數(shù),、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān),，一般 1.5 ml 過夜培養(yǎng)菌體可收獲約 10 ug 高拷貝質(zhì)粒。

重要提示：

一,、第一次使用前請先在去蛋白液 PE,、漂洗液 WB 中加入指ding量無水乙chun（見瓶身標(biāo)簽），充分混勻,，并做好標(biāo)記,，以免多次加入。

二,、shou次使用時(shí)請先將 RNase A 全部加到溶液 P1 中,，混勻，每次使用后置于 2 ~ 8℃保存,。

操作步驟：

1.   柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul 的平衡液,，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液,，將吸附柱重新放回收集管中,。

2. 取 1~ 5 ml 過夜培養(yǎng)的菌液,，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec，盡量倒干上清,，收集菌體,。

（注意：根據(jù)菌液的濃度決定取液量，濃度高時(shí)取 1.5 ml 菌液離心即可,，濃度低時(shí)可多收集一次）

3. 加入 250 ul 溶液P1,，重懸菌體沉淀，渦旋震蕩至che底懸浮,。

（注意：如有未che底懸浮的菌塊會影響裂解,，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低）

4. 加入 250 ul 溶液P2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次,，使菌體充分裂解，室溫放置 4 min,。

（注意：不可劇烈震蕩,，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時(shí)間不要超過 5 min,，以免質(zhì)粒受到破壞,，如未wan全變得清亮，可能是菌體太多,，可增加溶液 P2 的用量,，在后續(xù)的操作中溶液 P3 的用量也要相應(yīng)增加）

5. 加入 350 ul 溶液 P3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次,，充分混勻時(shí)會出現(xiàn)白色絮狀沉淀,，

然后室溫 12,000 rpm 離心 10 min。

（注意：加入溶液 P3 后應(yīng)立即混合,，避免產(chǎn)生 SDS 的局部沉淀）

6.   將上清液轉(zhuǎn)移到吸附柱中,，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，質(zhì)粒被吸附在膜上,，棄濾液,。

7.可選步驟：向吸附柱中加入 500 ul 去蛋白液 PE，室溫 12,000 rpm 離心 1 min,，棄濾液,。

（注意：去蛋白液 PE 為濃縮液，按要求加入無水乙chun,，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋,，以防酒精揮發(fā)）

（注意：如果宿主菌是 endA-，如 DH5α,，此步驟可省略,。如果宿主菌是 endA+,，如 TG1、BL21,、 HB101,、JM101 等，此步驟不可省略,，因這些宿主菌含有大量的核酸mei,，易降解質(zhì)粒。如果提取低拷貝質(zhì)粒也推薦采用此步驟）

8. 加入 600 ul 漂洗液 WB,，室溫 12,000 rpm 離心 30 sec,，棄濾液。

（注意：漂洗液 WB 為濃縮液,，按要求加入無水乙chun,，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)）

9. 重復(fù)步驟 8 一次,。

10.   室溫 12,000 rpm 離心 2 min,，甩干殘留液體。

（注意：此步不能省略,，否則殘留乙chun會影響質(zhì)粒的后續(xù)使用）

11.  將吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 離心管（自備）中,，加入 50 ~ 100 ul 的洗脫緩沖液 EB，室溫放置 2 min,，12,000 rpm 離心 1 min,，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。

（注意：事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱洗脫緩沖液 EB,，可增加洗脫效率,；如果需要較多量質(zhì)粒，可將得到的溶液重新加入吸附柱中,，再次離心 1 min 收集,；如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間,。）

低拷貝或大質(zhì)粒（>10 kb）提取

如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?10 kb 的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量,，使用 5 ~ 10 ml 過夜培養(yǎng)物,，同時(shí)按照比例增加溶液 P2、P2,、P3 的用量,，脫緩沖液 EB 應(yīng)在 65℃水浴預(yù)熱，在吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)延長時(shí)間，以增加提取效率,，其它步驟相同,。

高純度質(zhì)粒小提試劑盒（離心柱型）核酸提取