海洋動物組織基因組DNA快速提取試劑he（離心柱型）

動物組織基因組DNA快速ti取試劑he 核酸提取

目錄號：40317

適用于快速提取各種海洋動物組織基因組DNA

試劑盒組成、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果

儲存事項:

1.   結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.   為避免降低活性,、方便運輸,，提供蛋白meiK為凍干粉狀，收到后,，可短暫離心后,，加入1ml滅菌水溶解，因為反復(fù)凍融可能會降低mei活性,，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存,，－20℃保存。

3.   避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化,、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

 產(chǎn)品介紹：

du特的結(jié)合液/蛋白meiK迅速裂解細胞和滅活細胞內(nèi)核酸mei,，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,， 抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

注意事項：

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,，不影響下游mei切、連接等反應(yīng),。也可以使用水洗脫,，但應(yīng)該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率,。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃,。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl,， 1mM EDTA,，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游mei切反應(yīng),，使用時可以適當稀釋,。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB中加入zhi定量無水乙chun，充分混勻,，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙chun,，以免多次加入!

1.        切取不多于30mg 的組織材料，放入裝有180μl組織裂解液SL的1.5ml離心管中,，渦旋振蕩15 秒,。

    根據(jù)提取的組織不同,，起始量也稍有不同，腮的細胞量較大,，一般建議提取量不超過20mg,。如果裂解困難，可先用液氮研磨,。

2.     加入20μl的蛋白meiK溶液(20mg/ml),，立刻渦旋振蕩充分混勻。將裂解物放置在55℃水浴1-3小時或者直到組織消化wan全,。

不同組織裂解時間不同,，通常需0.5–2小時即可完成。扇貝組織0.5小時基本可裂解wan全,，蝦和魚類組織1小時,。每小時振蕩混合樣品2-3次，每次振蕩混勻15 秒,。

可選做步驟: 如果RNA殘留較多,，需要去除RNA，可在完成步驟2后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,，振蕩混勻,，室溫放置5-10分鐘。

3.     加入200μl 結(jié)合液CB,，立刻渦旋振蕩充分混勻,，70℃放置10分鐘。

4.     冷卻后加100μl 異丙chun,，充分顛倒或渦旋振蕩充分混勻,，此時可能出現(xiàn)絮狀沉淀。

5.     將上一步混合物和可能的沉淀都加入一個吸附柱AC中,，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒，倒掉收集管中的廢液,。

   如果有不溶組織物可能堵住槍頭,，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去,，該做法是為了去除不溶物,，以          免堵塞離心柱。

   上述步驟中立刻渦旋或者吹打充分混勻非常重要,，混勻不充分嚴重降低產(chǎn)量,，必要時如樣品粘稠不易混勻時可以渦旋振蕩15秒混勻。

6.        加入500μl抑制物去除液IR,，12,000rpm 離心30秒,，棄廢液,。

7.        加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙chun!），12,000rpm 離心30秒,，棄掉廢液,。

8.        加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒,，棄掉廢液,。

9.        將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘,，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

10.     取出吸附柱AC,，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘,，12,000rpm 離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘,，12,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大，洗脫效率越高,，如果需要DNA濃度較高,，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于50μl,，體積過小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產(chǎn)量。

11.     DNA可以存放在2-8℃,，如果要長時間存放,，可以放置在－20℃。

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