凋亡DNA Ladder快速ti取試劑盒

凋亡DNA Ladder快速ti取試劑盒 核酸提取

目錄號(hào)：40116

適用范圍：

適用于快速提取凋亡DNA Ladder

試劑盒組成、儲(chǔ)存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果,。

儲(chǔ)存事項(xiàng):

1.   裂解/結(jié)合液CB低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。

2.   避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化,、pH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹：

細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),，染色質(zhì)DNA在核小體之間發(fā)生斷裂,，最終形成200bp整數(shù)倍的DNA片段，這些DNA片段被提取后,，經(jīng)電泳及溴化乙錠染色后形成梯子狀外觀,，謂之DNA Ladder。血液和組織培養(yǎng)細(xì)胞在裂解/結(jié)合液中裂解后,，釋放出來(lái)的DNA片段在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽,、細(xì)胞代謝物,、蛋白等雜質(zhì)去除,，最后低鹽的洗脫緩沖液將DNA Ladder片段從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.        不需要使用有毒的苯fen等試劑,，也不需要乙chun沉淀等步驟,。

2.        本公司du有的裂解/結(jié)合液配方有效裂解細(xì)胞，使用本試劑盒不需要加入昂貴的蛋白meiK處理,，大大降低了使用成本和加快了處理速度,。

3.        節(jié)省時(shí)間，簡(jiǎn)捷,，單個(gè)樣品操作一般可在10分鐘內(nèi)完成,。

注意事項(xiàng)

1.        所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī),，如Eppendorf 5415C 或者類(lèi)似離心機(jī),。

2.        開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3.        裂解/結(jié)合液CB含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚，眼睛和衣服,。若沾染皮膚,、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

4.        一般2×10⁶培養(yǎng)細(xì)胞DNA產(chǎn)量為10-20μg,， 200μl人全血典型產(chǎn)量為3-6μg。

5.        一般電泳檢測(cè)時(shí)典型上樣量為2-3μg純化的DNA,，如果凋亡率低,，有可能只見(jiàn)到基因組DNA，而見(jiàn)不到DNA ladder,，可以試試加大上樣量,。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）

提示： 第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入zhi定量無(wú)水乙chun，充分混勻,，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙chun,，以免多次加入!

1.        取2×10⁶個(gè)細(xì)胞（懸浮細(xì)胞或者組織培養(yǎng)細(xì)胞重懸在200μl PBS中）或者200μl全血（大約含有2×10⁶個(gè)細(xì)胞）加入200μl 裂解/結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩充分混勻,。

可選做步驟: 如果RNA殘留較多,，影響凋亡DNA ladder的觀察，可以在加入200μl裂解/結(jié)合液CB 前加20μl RNase A(25mg/ml)溶液,，振蕩混勻,，室溫放置5-10分鐘。

細(xì)胞或者全血處理起始量最大可達(dá)300μl,，如果起始量介于200μl-300μl之間,，則需要按比例相應(yīng)提高后面使用試劑量,。

2.        室溫（15℃-20℃）放置10分鐘。

3.        加入100μl 異丙chun,，立刻渦旋振蕩充分混勻,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀。

上述步驟中適當(dāng)力度充分混勻非常重要,，混勻不充分嚴(yán)重降低產(chǎn)量,。如果樣品粘稠不易混勻，則可以渦旋振蕩15秒,。

4.        將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一個(gè)吸附柱AC中,，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液,。

5.        加入700μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙chun!）,，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

6.        加入500μl漂洗液WB,，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液,。

7.        將吸附柱AC放回空收集管中,，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙chun影響洗脫效率和下游反應(yīng),。

8.        取出吸附柱AC，放入一個(gè)干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預(yù)熱）,， 室溫放置3-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大,，洗脫效率越高，如果需要DNA濃度較高,，可以適當(dāng)減少洗脫體積,， 但是最小體積不應(yīng)少于50μl，體積過(guò)小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產(chǎn)量,。

9.        DNA可以直接使用或者存放在－20℃，但是不要超過(guò)14天,。

10.     取大約2-3μg純化的DNA電泳檢測(cè)（注意200μl人全血典型產(chǎn)量只有3--6μg）,。

問(wèn)題與解決方法:

凋亡DNA Ladder快速ti取試劑盒 核酸提取