固定包埋組織DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

固定包埋組織DNA快速ti取試劑盒 核酸提取

目錄號(hào)：40312

適用范圍：

適用于快速提取各種福爾馬林固定和石蠟包埋組織DNA

試劑盒組成,、儲(chǔ)存、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果

儲(chǔ)存事項(xiàng):

1.   結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.   為避免降低活性,、方便運(yùn)輸,，提供蛋白meiK為凍干fen狀，收到后,，可短暫離心后,，10mg/20mg加入0.5ml/1ml滅菌水溶解，因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會(huì)降低mei活性,，因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存，－20℃保存,。

3.   避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化、pH值變化,，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品介紹：

福爾馬林固定或者石蠟包埋組織通過du特裂解液熱處理和蛋白meiK共同作用迅速裂解細(xì)胞釋放出基因組DNA，然后基因組DNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟,， 抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,， 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.        離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好,?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.        不需要使用有毒的苯fen等試劑,，也不需要乙chun沉淀等步驟,。

3.        快速，簡(jiǎn)捷,，單個(gè)樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成,。

多次柱漂洗確保高純度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值達(dá)1.7～1.9,，長(zhǎng)度可達(dá)30kb -50kb,，可直接用于PCR，Southern-blot和各種mei切反應(yīng),。

注意事項(xiàng)：

1.        所有的離心步驟均在室溫完成,，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī),。

2.        需要自備乙chun（需要準(zhǔn)備100%/80%/60%/40%不同濃度）或者二甲苯,。

3.        實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到37℃?zhèn)溆谩?/span>

4.        結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套,，避免沾染皮膚,，眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時(shí),，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.        洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,，不影響下游mei切,、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,，但應(yīng)該確保批pH大于7.5,， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在－20℃,。DNA如果需要長(zhǎng)期保存,，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA,，pH 8.0）,，但是EDTA可能影響下游mei切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋,。

操作步驟：（實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)先閱讀注意事項(xiàng)）

提示：第一次使用前請(qǐng)先在漂洗液WB中加入zhi定量無水乙chun,，充分混勻,，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙chun，以免多次加入!

1.        將組織切片放入離心管子,，浸泡在二甲苯中脫蠟約30分鐘（具體時(shí)間根據(jù)切片厚度調(diào)整）,。

2.        將切片依次放入100%乙chun/80%乙chun/60%乙chun/40%乙chun/去離子水，每個(gè)液體中浸泡10秒鐘重新水化切片,。

剛放入100%乙chun時(shí),，應(yīng)該見到切片變白。

3.        顯微鏡觀察下,，用刀片切下擬提取DNA的目標(biāo)組織,，放入預(yù)先稱重的1.5ml離心管。再次稱重,，計(jì)算出切片組織重量,。

4.        在25-50mg組織中加入200μl裂解液FTL,再加入20μl的蛋白meiK溶液(20mg/ml)，立即混勻混勻后置37℃水浴過夜,。

5.        再加入10μl的蛋白meiK溶液(20mg/ml),，混勻后55℃水浴1-2小時(shí)。

此步驟后,，不應(yīng)該見到粗大的組織顆粒了,。

6.        加入200μl 結(jié)合液CB，立刻渦旋振蕩20秒充分混勻后置70℃水浴10分鐘,。

7.        冷卻后加入100μl 異丙chun,，立刻渦旋振蕩30秒充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,。

8.        用1毫升的槍頭吸取混合物,，將混合物加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心60秒,，倒掉收集管中的廢液,。

如果有不溶組織物可能堵住槍頭，可將槍頭在吸水紙上輕蹭去除不溶物,；如果吸上來的混合物少則可以將槍頭和不溶物一起棄去,，該做法是為了去除不溶物，以免堵塞離心柱,。,。

9.        加入500μl抑制物去除液IR,，12,000rpm 離心30秒,，棄廢液。

10.     加入700μl漂洗液WB（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙chun!）,，12,000rpm 離心30秒,，棄掉廢液,。

11.     加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒,，棄掉廢液,。

12.     將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘,，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

13.     取出吸附柱AC,，放入一個(gè)干凈的離心管中,，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB （洗脫緩沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好）， 室溫放置3-5分鐘,，12,000rpm 離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘,，12,000rpm離心1分鐘,。

洗脫體積越大，洗脫效率越高,，如果需要DNA濃度較高,，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是最小體積不應(yīng)少于50μl,，體積過小降低DNA洗脫效率,，減少DNA產(chǎn)量。

14.     DNA可以存放在2-8℃,，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放,，可以放置在－20℃。

附錄：另外一種脫蠟方式

1.      將目標(biāo)組織切片放入離心管,，加入1ml 100%二甲苯,，渦旋振蕩10秒。瞬間離心把組織全部浸入到二甲苯,。

2.      50℃水浴3分鐘熔解石蠟,，20-25℃最高速離心2分鐘，收集組織到管底,。

3.      小心用移液器吸棄上清二甲苯,，注意不要吸到沉淀。

4.      加入1ml無水乙chun,，渦旋振蕩,，最高速離心2分鐘，小心吸棄上清乙chun。

5.      加入1ml無水乙chun,，重復(fù)步驟6一遍,，盡可能吸棄所有乙chun。

6.      室溫或者37℃ 晾干乙chun10分鐘或直到所有乙chun揮發(fā)干,。

問題與解決方法：

固定包埋組織DNA快速ti取試劑盒 核酸提取