FlashPure Universal Genomic DNA Kit

血液/細(xì)胞/組織/鼠尾/細(xì)菌基因組 DNA ti取試劑盒（離心柱型）

細(xì)胞基因組DNA快速ti取試劑盒 核酸提取

目錄號:40110

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

無水乙chun，RNase A（可選）,，溶菌mei（用于革蘭氏陽性菌,，可選）

保存條件：

室溫（15~25℃）

蛋白mei K，室溫可保存 6 個(gè)月,，4℃保存 12 個(gè)月,，~ 20℃保存 2 年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn) 

產(chǎn)品簡介：

適用于從xue液,、培養(yǎng)細(xì)胞,、動(dòng)物組織、植物組織,、鼠尾,、細(xì)菌等樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。

本試劑盒采用du特的裂解液,，利用硅膠膜特異吸附DNA,，無需fenlv仿等有毒試劑，也無需進(jìn)行耗時(shí)的chun類沉淀,，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA,，無蛋白,、核酸mei污染，可直接進(jìn)行PCR,、mei切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.    簡便快速：30 min 內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA,。

2.    安全無毒：無需苯fen/lv仿抽提。

3.    高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量 200µl 全血可提取出 3～6µg 基因組 DNA,，

4.    高純：OD260/280=1.7～1.9,，長度可達(dá) 30～50 kb，可直接進(jìn)行 PCR,、mei切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。

注意事項(xiàng):

1.    如果裂解液TL、結(jié)合液CB,、抑制物去除液IR有沉淀析出,，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用,。

2.    開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3.    為了最jia效果,，最hao使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過3次的標(biāo)本,，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量,，不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大,。

操作步驟:

第一次使用前,，請先在漂洗液 WB 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶身的標(biāo)簽,。提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行,。

1.     柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液，

12,000 rpm 離心 1 min,，棄濾液,，將吸附柱重新放回收集管中。

（請使用當(dāng)天處理過的柱子）

2.     材料處理：

a.       血液

取 200 μl 新鮮,、冷凍或加入各種抗凝劑的血液,，放入 1.5 ml 離心管。

如果全血起始量小于200 μl,，則用1× PBS補(bǔ)足到200 μl,。

如果起始量介于300 μl~1 ml之間，則需要先進(jìn)行紅細(xì)胞裂解操作: 在樣品中加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液顛倒混勻,，室溫放置10 min,，期間再顛倒混勻幾次。13,000 rpm離心20 sec(對于1.5 ml離心管)或2,000 ~ 3,000 rpm離心5 min(對于15 ml離心管),，吸去上清,，留下白細(xì)胞沉淀（如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，則再次重復(fù)上述紅細(xì)胞裂解步驟）,，加入 200 μl 1× PBS,，振蕩至che底懸浮,。

如果處理血樣為禽類、鳥類,、兩棲類或更低級生物的抗凝血液,，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量僅用5 ~ 20 μl,，可加1× PBS 補(bǔ)足到200 μl后,，進(jìn)行下面的裂解步驟。

b.       培養(yǎng)細(xì)胞

① 105 ~ 106 懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5 ml 離心管,；對于貼壁細(xì)胞,，應(yīng)該先用胰蛋白mei消化后吹打下來收集。

②  13, 000 rpm 離心 10 sec,，吸棄上清,，留下細(xì)胞團(tuán)。

③ 加入 200 μl 1× PBS 重懸洗滌細(xì)胞,，13, 000 rpm 離心 10 sec,，wan全吸棄上清。

④ 再次加入 180 μl 1× PBS,，振蕩混勻,，使細(xì)胞che底懸浮。

c.       動(dòng)物組織,、植物組織（例如鼠肝腦或者植物葉片）

將 20 ~ 50 mg（脾組織用量應(yīng)少 10 mg）新鮮或者解凍的組織用解剖dao切成小碎塊（切成小塊可以提高產(chǎn)量）或者在液氮中研磨組織成細(xì)粉后,，轉(zhuǎn)入裝有 180 μl 組織裂解液 TL 的 1.5 ml 離心管中，用大口徑槍頭吹打混勻,。

d.       鼠尾

將 0.2 ~ 0.5 cm 的鼠尾巴尖(即 20 ~ 50 mg)剪碎（一定要剪 0 ~ 2cm范圍內(nèi)的尾巴尖,，否則裂解效果不好），或者在液氮中研磨成細(xì)粉后,，轉(zhuǎn)入裝有 180 μl 裂解液 TL 的 1.5 ml 離心管中,，用大口徑槍頭吹打混勻。

e.       細(xì)菌

① 取 0.5 ~ 2 ml 培養(yǎng)菌液（最多不超過 2×109 個(gè)細(xì)胞）,，10, 000 rpm,，

離心 30 sec，盡可能的吸棄上清,，收集菌體,。

起始處理量可以根據(jù)細(xì)菌密度、細(xì)胞種類,、預(yù)期產(chǎn)量進(jìn)行調(diào)整,，但是離心吸附柱最大吸附能力是 30 μg 基因組 DNA，如果菌體過量超過最大吸附能力,，反而會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量,。

② 加入 200 μl 1× PBS 重懸，10, 000 rpm 離心 30 sec,，吸棄上清,。

將細(xì)胞振蕩或者吹打充分重懸于 180 μl 1× PBS 中。

注意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌,，可略過 b 步驟,，加入溶菌mei進(jìn)行破壁處理，具體方法為：加入 180 μl 緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0,； 2 mM Na2-EDTA,；1.2% Triton X~100；臨用前加入終濃度為 20 mg/ ml 的溶菌mei(溶菌mei必須用溶菌mei干粉溶解在緩沖液中進(jìn)行配制,，否則會(huì)導(dǎo)致溶菌mei無活性)),，37℃處理 30 min 以上。

3.     加入 20 μl 蛋白meiK 溶液,，充分混勻,。

a.    提取血液基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻,，即可進(jìn)行下一步,。

b.    提取細(xì)胞基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻,，即可進(jìn)行下一步,。

c.     提取動(dòng)物組織、植物組織的基因組時(shí),，加入 Proteinase K 混勻后,，在 56℃放置 1~3 小時(shí)，每小時(shí)顛倒混合樣品 2~3 次,，直至組織wan全消化溶解,，再進(jìn)行下一步。

d.    提取鼠尾基因組時(shí),，加入 Proteinase K 混勻后,，在 56℃放置 3 小時(shí)

（也可以過夜消化），每小時(shí)顛倒混合樣品 2~3 次,，直至組織wan全消化溶解,，再進(jìn)行下一步。

e.    提取細(xì)菌基因組時(shí),，只需加入 Proteinase K 混勻,，即可進(jìn)行下一步。

4.     （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液,，振蕩混勻,，室溫放置 5 ~ 10min,。

5.     加入200 μl 結(jié)合液CB，充分振蕩混勻,，70℃水浴或金屬浴處理10 min,。

6.     冷卻后加 100 μl 無水乙chun (或異丙chun)，充分振蕩混勻,，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

7.     將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè)DNA 吸附柱中,，（吸附柱放入收集管中）

13, 000 rpm 離心 1 min,，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液,。

8.     加入 500 μl 抑制物去除液 IR,，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液,。

9.     加入 600 μl 漂洗液 WB（請檢查是否已加入無水乙chun）,，13, 000 rpm

離心 30 sec，倒棄濾液,。

10.  重復(fù)步驟 9 一遍,。

11.  將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min,，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

12.  取出 DNA 吸附柱,，放入一個(gè)干凈的 1.5 ml 離心管中,，向吸附膜的中央加入 100 μl 洗脫緩沖液 EB （洗脫緩沖液事先在 80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量）， 室溫放置 3 ~ 5 min,，13, 000 rpm 離心 1 min,。

可將第一次洗脫所得溶液重新加入離心柱中，室溫放置 2 min,，13, 000 rpm 離心 1 min,。可以提高濃度 10%左右,。

13.  DNA 可以存放在~ 20℃,，如果要長時(shí)間存放，可以放置在~70℃,。

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