諾博萊德 CTAB植物基因組DNA快速提取試劑盒（離心柱型）

CTAB植物基因組DNA快速ti取試劑盒 核酸提取

目錄號：40114

適用范圍：

適用于快速提取植物基因組DNA

試劑盒組成、儲存,、穩(wěn)定性：

本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果,。

儲存事項:

1. 裂解液 PL、結合液 PQ 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現析出和沉淀,，可以在 55℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā),、氧化,、pH 值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子,。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品介紹：

改進的經典 CTAB 植物 DNA 抽提液內（添加多種針對植物特點的多糖,、多fen去除成份）迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸mei，lv仿抽提后通過離心清除多糖,、多酚和蛋白質（根據需要,，上清中還加入異丙chun離心沉淀基因組 DNA，進一步去除其它各種雜質）,，然后基因組 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜,，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟， 進一步將多糖,、多fen和細胞代謝物,、蛋白等雜質去除，zui后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組 DNA 從硅基質膜上洗脫,。

產品特點：

 1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口特制吸附膜,，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好,?？朔藝a試劑盒膜質量不穩(wěn)定的弊端。

 2.不需要使用有毒的苯fen等試劑,，也不需要乙chun沉淀等步驟,?？焖伲喗?，單個樣品操作一般可在 1 小時內完成,。

 3.數種去多糖、多fen成份和多次柱漂洗確保高純度,，OD260/OD280 典型的比值達

 4.1.7～1.9，長度可達 30 kb -50kb,，可直接用于 PCR,，Southern-blot 和各種mei切反應

注意事項：

 1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機,，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機,。

 2.開始實驗前將需要的水浴先預熱到65℃?zhèn)溆谩?/span>

 3.需要自備lv仿/異戊chun（體積比24：1混合）、無水乙chun和β-巰基乙chun,。

 4.結合液PQ 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚,、眼睛和衣服,。若沾染皮膚、眼睛時,，要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。

 5.不同來源的植物組織材料中提取DNA 的量會有差異，一般100mg新鮮組織典型產量可達3-25μg,。洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,， 不影響下游mei切、連接等反應,。也可以使用水洗脫,， 但應該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率,。用水洗脫DNA應該保存在－20℃,。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫 （10mM Tris-HCl,， 1mM EDTA,，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游mei切反應,，使用時可以適當稀釋,。        

 標準操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）提示：

  第一次使用前請先在漂洗液 WB 和結合液 PQ 中加入zhi定量的無水乙chun，充分混勻,，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙chun,，以免多次加入!

 取所需適量裂解液 PL 放置在 65℃預熱,，使用前加入 β-巰基乙chun到終濃度 2%。

 1.取適量植物組織（新鮮組織 100 mg 或干重組織 30 mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉,。

 2.轉移細粉到一個 1.5ml 離心管,，不要解凍，加 600μl 65℃預熱的裂解液 PL (確認已加入 β-巰基乙chun至 2%),，劇烈渦旋振蕩混勻,，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解。

（如果組織裂解困難,，可根據需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解,。）

 3.65℃水浴 20-60 分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數次,。

（可選:如果組織干燥或者產量低,，可以適當延長水浴時間。如果 RNA 殘留多,，可在水浴前加入 6μl RNA mei（20mg/ml）,。）

 4.加入 700μl lv仿/異戊chun（體積比 24：1 混合），顛倒充分混勻幾分鐘（或者渦旋混勻）,，13,000rpm 離心 5 分鐘,。

（若提取的植物組織富含多糖多fen，可以在第4步前用等體積fen/lv仿（1：1）抽提一遍,。）

 5.小心吸取上清到一個新的1.5ml離心管,，注意不要吸到界面物質。

（如上清比較渾濁,，則需要重復步驟4一遍,，直到得到透亮上清。）

 6.較精確估算上清量,，加入1.5 倍體積結合液PQ（請先檢查是否已加入無水乙chun!）后立刻渦旋,，充分混勻。此時可能出現沉淀,，但不影響實驗結果,。

 7.將上一步所得混合物（包括可能出現的沉淀）加入一個DNA吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心30秒,，倒掉收集管中的廢液（先加700μl離心,，棄廢液，再加入剩余的溶液,，再次離心）,。

 8.加入500μl 抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液,。

 9.加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙chun!）,，12,000rpm離心30秒，棄掉廢液,。

 10.加入 500μl 漂洗液 WB,，12,000rpm 離心 30 秒，棄掉廢液,。

 11.將 DNA 吸附柱放回空收集管中,，13,000rpm 離心 2 分鐘，盡量除去漂洗液,， 以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應,。

 12.取出 DNA 吸附柱，放入一個干凈的離心管中,，在吸附膜的中央加100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱），室溫放置 3-5 分鐘,，12,000rpm離心1分鐘,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘,，12,000rpm離心 1 分鐘,。

（洗脫體積越大，洗脫效率越高,，如果預計和需要產量高,，可增大洗脫體積，如果需要 DNA 濃度較高,，可以適當減少洗脫體積,，但是zui小體積不應少于 50μl，體積過小降低 DNA 洗脫效率,，減少DNA產量,。）

 13.DNA可以存放在 2-8℃，如果要長時間存放,，可以放置在－20℃,。

附錄（低DNA含量或者產量低樣品操作步驟）：

 1.取適量植物組織（新鮮組織 400 mg 或干重組織 200 mg）在研缽中加入液氮充分碾磨成細粉。

 2.轉移細粉到一個 15ml 離心管,，不要解凍,，加入 9ml 65℃預熱的裂解液 PL (確認已經加入 β-巰基乙chun至 2%)，劇烈渦旋振蕩混勻,，用大口徑槍頭吹打幫助裂解,。

（如果組織裂解困難，可根據需要加一個輕柔勻漿 10 秒的步驟幫助裂解,。）

 3.室溫放置 60 分鐘,，中間不時顛倒離心管以混合樣品數次,。

（如果組織干燥或者產量低，可以放置在 65℃水浴,。）

 4.加 4.5ml lv仿/異戊chun（體積比 24：1 混合）,，渦旋充分混勻，3,000g 離心 10 分鐘,。

 5.小心吸取上清到一個新的 15ml 離心管,，注意不要吸到界面物質。重復一遍步驟 4,。

 6.小心吸取上清到一個新的 15ml 離心管,，估算上清量，加入 0.7 倍體積的異丙chun,，渦旋混勻來沉淀

CTAB植物基因組DNA快速ti取試劑盒 核酸提取