諾博萊德 Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit

動物組織/細胞 RNA/ DNA 共提試劑盒（免lv仿）

動物組織細胞RNA/DNA共提試劑盒

目錄號：91219

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

產(chǎn)品簡介

Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit（免lv仿）適用于從各種動物組織、細胞中同時提取出總 RNA 和基因組 DNA,，提取全程不需要使用lv仿,，得到包含總 RNA，不需要DNase I消化，可直接用于 RT,、RT-PCR,、RT-qPCR,、RACE,、芯片、測序等,?；蚪M DNA 也可以直接用于下游的 Southern、mei切,、PCR 等各種試驗,。

du特的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞 RNase/DNase，然后裂解混合物RNA/DNA同時通過一個gDNA吸附柱,，基因組DNA被吸附而RNA穿透濾過,。gDNA 吸附柱上的基因組DNA經(jīng)過一系列漂洗、洗脫后得到純凈基因組DNA,。濾過的總RNA,，先用乙chun調(diào)節(jié)結(jié)合條件，然后轉(zhuǎn)入RNA吸附柱,，在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于RNA吸附柱上,，接著通過一系列快速的離心-漂洗-離心-洗脫，得到純凈的總RNA,。

注意事項

1. 采集 RNA 樣本時,，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-100) 中,，可在37℃保存一天,，在25℃保存一周，在 4℃保存一個月,，在-20℃或者–80℃長期保存,。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質(zhì)量,。

3. 提取時,，RNA 在裂解液 MRL Plus 中時不會被 RNase 降解，但后續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭和器皿,。

4. 樣品在加入裂解液 MRL Plus 并勻漿后,，可在–80℃保存一個月以上。

5. 所有的溶液應(yīng)該是澄清的,，如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀,，此時不應(yīng)該直接使用，可在 37℃水浴加熱幾分鐘,，即可恢復(fù)澄清,。

重要提示：

① 第一次使用前, 請先在漂洗液 RW ,、70%乙chun、漂洗液 WB 瓶中加入

zhi定量無水乙chun,，詳見瓶上的標(biāo)簽,。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進行，提取效果更佳,！

操作步驟

1. 動物組織：

a．電動勻漿：取新鮮組織10~20 mg加入 500μl裂解液MRL Plus,，電動勻漿，直到無明顯組織塊即可,。

b．液氮研磨：液氮研磨組織成細粉,，取10~20 mg組織細粉加入500μl 裂解液 MRL Plus，劇烈渦旋振蕩,，直到無明顯粉末團即可,。

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片,。

d．下接操作步驟 3,。

2. 細胞

a. 懸浮細胞：離心收集細胞，加入500μl裂解液 MRL Plus（<8x10⁶細胞）, 吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩20sec,，充分裂解。

b. 貼壁細胞：不需要消化,，吸棄培養(yǎng)基后,，直接在培養(yǎng)皿/板中加裂解液MRL Plus（每<8x10⁶細胞加500μl裂解液MRL Plus）進行消化、裂解,；或者,，先用胰mei消化后離心收集細胞，然后加入裂解液MRL Plus,，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解,。

c. 下接操作步驟 3,。

3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm離心1min,，基因組DNA被吸附在膜上,，保留濾液（RNA 在濾液中）。把 gDNA 吸附柱放入2.0 ml離心管,，置于4℃度,，以備提取DNA用。

以下是總RNA的提取步驟：

4. 向濾液中加入等體積的70%乙chun，用移液器吹打混勻,。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750μl濾液混合物至RNA吸附柱中,，13,000 rpm離心1min，此時,，RNA 被吸附在膜上,，倒棄濾液。

6. 加入700μl去蛋白液RW1,，室溫放置1min,13,000rpm離心30sec,，倒棄濾液。

7. 加入500μl漂洗液RW（檢查是否已加入乙chun）,，13,000 rpm離30sec，倒棄濾液,。

8. 重復(fù)步驟 7,。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心2min,，除去膜上殘留的乙chun,。

10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free 1.5 ml離心管中,，向RNA吸附膜的中央部位懸空滴加30~50μl 的RNase-free H2O,，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心1min,，管底即總 RNA,。

11. 得到RNA，可直接用于下游實驗,，或于-70℃保存,，以免降解。

以下是 DNA 的提取步驟：

12. 向步驟3的gDNA吸附柱中,，加入500μl抑制物去除液IR,，12,000 rpm離心30sec，倒棄濾液,。

13. 加入700μl漂洗液WB（檢查是否已加入乙chun）,，12,000 rpm離心30sec，倒棄濾液,。

14. 加入500μl漂洗液WB,，12,000rpm 離心30sec，倒棄濾液,。

15. 將 DNA 吸附柱放回空收集管中,，13,000rpm 離心2 min，甩干吸附膜上殘留的乙chun。

16. 取出 gDNA 吸附柱,，放入新的 1.5 ml 的離心管中,，向吸附膜的中央懸空滴加100μl 洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在65~70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 3~5 min,，12,000rpm離心1 min,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2min,，12,000 rpm離心1 min,。

17. 得到的DNA可以存放在2~8℃，如果要長時間存放,，可以放置在- 20℃,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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