諾博萊德 Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit

動(dòng)物組織/細(xì)胞 RNA/ miRNA/DNA 共提試劑盒（免lv仿）

動(dòng)物組織/細(xì)胞RNA/ DNA共提試劑盒 核酸提取

目錄號(hào)：91418

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit（免lv仿）適用于從各種動(dòng)物組織、細(xì)胞中同時(shí)提取出RNA/miRNA（包含miRNA的總RNA）,、基因組DNA,，提取全程不需要使用lv仿，得到包含miRNA的總RNA,，不需要DNase I消化,，可直接用于miRNA和mRNA的RT、RT-PCR,、RT-qPCR,、RACE、芯片,、測(cè)序等,。基因組 DNA 也可以直接用于下游的 Southern,、mei切,、PCR等各種試驗(yàn)。

du特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞 RNase/DNase,，然后裂解混合物 RNA/miRNA/ DNA 同時(shí)通過一個(gè) gDNA 吸附柱,，基因組 DNA 被吸附而 miRNA/RNA 穿透濾過。gDNA 吸附柱上的基因組 DNA 經(jīng)過一系列漂洗、洗脫后得到純凈基因組 DNA,。濾過的 RNA/miRNA,，先用乙chun調(diào)節(jié)結(jié)合條件，然后轉(zhuǎn)入 RNA 吸附柱,，在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于 RNA 吸附柱上,，接著通過一系列快速的離心-漂洗-離心-洗脫，得到純凈的 RNA/miRNA（包含 miRNA 的總 RNA）,。

注意事項(xiàng)

1. 采集 RNA 樣本時(shí),，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-100) 中,，可在 37℃保存一天,，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個(gè)月,，在-20℃或者–80℃長(zhǎng)期保存,。

2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)影響RNA的提取得率和質(zhì)量,。

3. 提取時(shí),，RNA在裂解液MRL Plus中時(shí)不會(huì)被RNase降解，但后續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase的吸頭和器皿,。

4. 樣品在加入裂解液 MRL Plus 并勻漿后,，可在–80℃保存一個(gè)月以上。

5. Wash Solution 2/3 可能加入乙chun使用幾天后,，可能會(huì)出現(xiàn)沉淀晶體,，并不影響使用，取其上清直接使用就可以,。

重要提示：

① 第一次使用前, 請(qǐng)先在 Wash Solution 1,、Wash Solution 2/3、漂洗液 WB 中加入zhi定量無水乙chun,，詳見瓶上的標(biāo)簽,。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~25℃）下進(jìn)行，提取效果更佳,！

操作步驟

1. 動(dòng)物組織：

a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織10~20mg加入500μl裂解液MRL Plus,，電動(dòng)勻漿，直到無明顯組織塊即可,。

b．液氮研磨：液氮研磨組織成細(xì)粉,，取10~20mg組織細(xì)粉加入500μl裂解液MRL Plus，劇烈渦旋振蕩,，直到無明顯粉末團(tuán)即可,。

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min,，沉淀不能裂解的碎片。

d．下接操作步驟 3,。

2. 細(xì)胞

a. 懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞,，加500μl裂解液MRL Plus（<8x10⁶細(xì)胞）, 吹打混勻，劇烈渦旋振蕩20sec,，充分裂解。

b. 貼壁細(xì)胞：不需要消化,，吸棄培養(yǎng)基后,，直接在培養(yǎng)皿中加裂解液MRL Plus（每<8x106細(xì)胞加500μl裂解液MRL Plus）進(jìn)行消化、裂解,；或者,，先用胰mei消化后離心收集細(xì)胞，然后加入裂解液MRL Plus,，吹打混勻,，劇烈渦旋振蕩20sec，充分裂解,。

c. 下接操作步驟 3,。

3. 將裂解勻漿物（或離心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心 1 min,，基因組 DNA 被吸附在膜上,，保留濾液（RNA/ miRNA/Protein 在濾液中）。

把gDNA吸附柱放入2.0ml離心管,，置于4℃度,，以備提取DNA用。

以下是 RNA/miRNA 的提取步驟：（包含 miRNA 的總 RNA）

4. 向?yàn)V液中加入 1.25 倍體積的無水乙chun,，用移液器吹打混勻,。

5. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl濾液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離心1min,，此時(shí),，RNA 被吸附在膜上，保留濾液,，以備提取 Protein,。

濾液中含有Protein，請(qǐng)轉(zhuǎn)入一個(gè)合適大?。ㄖ辽?倍濾液體積）的離心管,，用于步驟 18開始的 Protein 提取。

6. 加入700μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun）,，室溫放置1 min, 13,000 rpm 離心30sec,，倒棄濾液,。

7. 加入500μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙chun），13,000 rpm離心30sec,，倒棄濾液,。

8. 重復(fù)步驟 7。

9. 將RNA吸附柱放回空收集管中,，13,000 rpm離心2min,，除去膜上殘留的乙chun。

10. 取出RNA吸附柱,，放入RNase-free 1.5ml離心管中,，向RNA吸附膜的中央部位懸空滴加30~50μl的RNase-free H2O，室溫放置1min,， 13,000rpm離心1min,，管底即包含miRNA 的總RNA。

11. 得到RNA/miRNA,，可直接用于下游實(shí)驗(yàn),，或于-70℃保存，以免降解,。

以下步驟為提取 DNA 步驟：

12. 向步驟3的gDNA吸附柱中,，加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm離心30 sec,，倒棄濾液,。

13. 加700μl漂洗液WB（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm離心30sec,，倒棄濾液,。

14. 加入500 μl漂洗液 WB，12,000rpm離心30 sec,，倒棄濾液,。

15. 將DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 離心2 min,，盡量除去漂洗液,，以免漂洗液中殘留乙chun抑制下游反應(yīng)。

16. 取出gDNA 吸附柱,，放入新的1.5 ml的離心管中,，向吸附膜的中央懸空滴加 100 μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65~70℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 3~5 min,，12,000 rpm離心1 min,。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置 2 min,，12,000 rpm離心1min,。

17. 得到的DNA可以存放在2~8℃,，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在- 20℃,。

與 RNA 相關(guān)的產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

與 miRNA 相關(guān)的產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR,，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

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