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石蠟包埋組織總 RNA 快速提取試劑盒 打印

石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒

目錄號：91310

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun,、二甲ben

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

適用于快速從福爾馬林固定,、石蠟包埋組織樣品中提取總RNA，提取的RNA,，可用于RT,，RT-PCR，RT-qPCR,，普通轉(zhuǎn)錄組測序,、RACE等,。

產(chǎn)品特點

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過程僅需 30 min,！

操作步驟

第一次使用前,，請先在漂洗液 RW 和 70%乙chun中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶身的標(biāo)簽,。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行,。

1. 修整去除過量包埋組織外石蠟，并切成 5~20 μm 厚切片,，開始的 2~3片拋棄不用,。

2. 收集總厚度不超過■40 μm 的石蠟切片到一個 2.0 ml 離心管中（例如：2 片 20μm、4 片 10μm,、8 片 5μm 的石蠟切片）,，或者不超過▲80 μm的石蠟切片到一個 2.0 ml 離心管中。

■代表處理切片總厚度≤40 μm,，▲代表處理切片總厚度≤80 μm

3. 加入 1 ml 100%二甲苯,，渦旋振蕩 10 sec,。瞬間離心把組織全部浸入到二甲苯。

4. 50℃水浴 3 min 熔解石蠟,，20~25℃zui高速離心 2 min,，收集到管底。

5. 小心吸棄上清二甲苯,，注意不要吸到沉淀,。

6. 加入 1 ml 無水乙chun，渦旋振蕩,，zui高速離心 2 min,，小心吸棄上清乙chun。

7. 加入 1ml 無水乙chun,，重復(fù)步驟 6 一遍,，盡可能吸棄所有乙chun。

8. 室溫或者 37℃晾干乙chun 10 min,，或直到所有乙chun揮發(fā)干,。

乙chunwan全晾干非常重要，微量的乙chun殘留也會導(dǎo)致 RNA 產(chǎn)量降低,。

9. 加入■150 μl ▲240 μl 裂解液 PKD,，渦旋振蕩（或者吹打），充分重懸組織沉淀,，短暫離心收集液體到管底,，加入 10 μl 蛋白mei K，吹打混勻,。

10. 55℃孵育 15min,，然后 80 ℃孵育 15min。

55℃孵育后,，可以將離心管取出放置在室溫,，等水浴鍋溫度升到 80℃后

再放入水浴鍋，精確的孵育 15min,。即使 2min 的延長也可能導(dǎo)致 RNA

的部分降解,。

11. 加入■320 μl ▲500 μl 結(jié)合液 RBC，充分吹打混勻,，調(diào)節(jié)結(jié)合條件,。

12. 轉(zhuǎn)移混合液至 gDNA 過濾器中，14,000 rpm 離心 30 sec,，收集濾液

（RNA 在濾液中）,。

應(yīng)避免吸到較大的未消化wan全的絮團(tuán)物質(zhì)上柱，以免堵塞離心柱,。

13. 加入■720 μl ▲1200 μl 無水乙chun到濾過液中,，吹打混勻,。

14. 將≤750 μl 濾液混合液加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液,。此時，RNA 被吸附在膜上,。重復(fù)此過程,，直到溶液全部上柱。

15. 加入 500 μl 漂洗液 RW,，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液。

16. 重復(fù)步驟 15 一次,。

17. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min,，除去乙chun,。

18. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase~free1.5 ml 離心管中,，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30 μl 的 RNase~free H2O,，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min,。

19. 提取的總 RNA,，可直接用于下游實驗，或于~70℃保存,，以免降解,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118~100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710~100 Script III All~in~one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600~500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

石蠟包埋組織總RNA提取試劑盒