Yeast Total RNA Mini Kit

酵母總 RNA 快速提取試劑盒

酵母總RNA提取試劑盒

目錄號：91110

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun、β-巰基乙chun

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

適用于從酵母樣本中提取總RNA,，提取的RNA可直接用于RT,，RT-PCR，RT-qPCR,，普通轉(zhuǎn)錄組測序,、RACE等。

產(chǎn)品特點

1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2,！

2. 高效：提取全過程僅需 30 min！

操作步驟

① 第一次使用前,，請先在漂洗液 RW,，詳見瓶身的標(biāo)簽。

②操作前,，在裂解液 RLT 中加入 1% 的 β-巰基乙chun,，例如 1ml RLT 中加入10 μl β-巰基乙chun。此裂解液zuihao現(xiàn)用現(xiàn)配,。配好的 RLT 可在 4℃放 30 天,。

③吸取使用量的緩沖液 SE 加入β-巰基乙chun至終濃度 0.2%，備用,。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行,。

1. 小量酵母培養(yǎng)細(xì)胞：

a．收集 1 ml（約 107細(xì)胞）處于對數(shù)生長期酵母培養(yǎng)物到 1.5 ml 離心管，12,000 rpm 離心30sec,，盡可能吸棄上清,。

b．加入100μl緩沖液SE中（確認(rèn)已經(jīng)加入 0.2% β-巰基乙chun），輕柔吹打充分重懸細(xì)胞,；根據(jù)酵母量加入約 20 μl Lytic Enzyme 儲液,，充分顛倒混勻，37℃溫育 15~30 min 消化細(xì)胞壁,，中間可顛倒數(shù)次幫助消化,。

注意：如果破壁效果不好導(dǎo)致產(chǎn)量低，可以加大 lytic Enzyme 用量來提高mei工作濃度,，還可以延長消化時間或者提高溫度到 45℃來提高效果,，不適合 Lytic Enzyme 消化的酵母可選用其它方法如0.5mm 玻璃珠渦旋擊打 ,，反復(fù)凍融等。

c．加入 380 μl 裂解液 RLT（確認(rèn)已加入 1% β-巰基乙chun）,，吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 sec,，充分裂解,。

注意：一般加入裂解液后充分渦旋吹打后應(yīng)該見不到明顯團(tuán)塊或者不溶物,極少數(shù)情況下如果有明顯團(tuán)塊或者不溶物可以將裂解物13,000rpm 離心 3 min,沉淀不能裂解的碎片或者不溶物, 將裂解物上清全部轉(zhuǎn)到一個新離心管再進(jìn)行下一步,。

d．加入 280 μl 無水 乙chun，立即吹打混勻,，不要離心,。

e．下接步驟 3。

2. 中量酵母培養(yǎng)細(xì)胞：

a． 收集 2~3 ml（約 3X107 細(xì)胞）處于對數(shù)生長期酵母培養(yǎng)物到 1.5 ml離心管（超過 1.5 ml 可分兩次在同一個離心管內(nèi)進(jìn)行收集細(xì)胞）,，12,，000rpm 離心30 sec，盡可能吸棄上清,。

b． 加入300 μl緩沖液SE中（確認(rèn)已經(jīng)加入β-巰基乙chun至終濃度0.2%）,，輕柔吹打充分重懸細(xì)胞；根據(jù)酵母量加入 50μl Lytic Enzyme 儲液,，充分顛倒混勻,，37℃溫育 15~30 min 消化細(xì)胞壁，中間可顛倒數(shù)次幫助消化,。

注意：如果破壁效果不好導(dǎo)致產(chǎn)量低,，可以加大 lytic Enzyme 用量來提高mei工作濃度，還可以延長消化時間或者提高溫度到 45℃來提高效果,，不適合Lytic Enzyme消化的酵母可選用其它方法如0.5mm玻璃珠渦旋擊打 ,，反復(fù)凍融等。

c． 13,000 rpm 離心 1 min,，盡可能吸棄上清,。

d． 加入 350μl 裂解液 RLT（確認(rèn)已經(jīng)加入 β-巰基乙chun至終濃度 1%），吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 sec,，充分裂解,。

注意：一般加入裂解液、充分渦旋吹打后,，應(yīng)該見不到明顯團(tuán)塊或者不溶物,。極少數(shù)情況下，如果有明顯團(tuán)塊或者不溶物,，可以將裂解物13,000 rpm 離心 3 min,，沉淀不能裂解的碎片或者不溶物, 將裂解物上清全部轉(zhuǎn)到一個新離心管再進(jìn)行下一步。

e． 加入等體積 70％乙chun（DEPC 水配制,，約 350μl）立即吹打混勻,。

f． 下接步驟 3,。

3. 將≤750μl 上清混合液加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 1 min,，

倒棄濾液,。此時，RNA 被吸附在膜上,。重復(fù)此過程,，直到溶液全部上柱。

4. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1,，室溫放置 1min,，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液,。

5. 加入 500μl 漂洗液 RW,，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液,。

6. 重復(fù)步驟 5 一次,。

7. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心 2 min,，除去乙chun,。

8. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中,，向 RNA 吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase-free H2O,，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min,。

9. 提取的總 RNA,，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存,，以免降解,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71711-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

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