Fungus Total RNA Mini Kit

真菌總 RNA 提取試劑盒（含 gDNA 過濾器）

真菌總RNA提取試劑盒

目錄號：91515

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15~25℃）下，存放 12 個月,，不影響使用效果,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取各種真菌的總RNA，gDNA過濾器能高效濾除gDNA,，提取的RNA,，可直接用于RT、RT-PCR,、RT-qPCR,、RACE、普通轉(zhuǎn)錄組測序,、芯片等,。

產(chǎn)品特點

1. 無毒：免lv仿、免 β-巰基乙chun,！

2. 高效：提取全過程僅需 20 min,！

3. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2,！

操作步驟

提示：

所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進行,。

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入指ding量無水乙chun，詳見瓶身的標(biāo)簽,。

1. 材料處理：

a．轉(zhuǎn)移 500 μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖fen去除劑 PAD 至 1.5 ml 離心管中,，混勻備用。

注意：糖fen去除劑 PAD 是提取多糖,、多fen,、次級代謝產(chǎn)物多,、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分。對于簡單樣本,，不加糖fen去除劑PAD,，RNA 產(chǎn)量可能會提高一些。

b．液氮中研磨真菌組織成細(xì)粉,，取≤50 mg 細(xì)粉轉(zhuǎn)入上述裝有 PRL 裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩 30 sec，充分混勻,。放離心管架上,，接著研磨下一個樣本。

（冬天氣溫低,， 37℃搖床放置 3 min,，可增強裂解效果，提高產(chǎn)量）

c． 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min,，沉淀不能裂解的碎片,。

注意：使用1 ml裂解液PRL和100μl糖fen去除劑PAD去裂解 100 mg 樣品，RNA 產(chǎn)量會翻倍,。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl,，注意不要吸到沉淀）轉(zhuǎn)入一個新的 1.5 ml離心管中，加入 0.5 倍體積（一般 240 μl）的無水乙chun, 吹打混勻,。

3. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管）,， 13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液,。此時,，絕大部分的 gDNA 被濾除，RNA 和少量 gDNA 殘留被吸附在膜上,。重復(fù)此過程,，直到溶液全部轉(zhuǎn)入 gDNA 過濾器。

4. 取出步驟 3 的 gDNA 過濾器,，放入一個新的 2.0ml 離心管中,，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 離心 1 min,，收集濾液（RNA 在濾液中）,，加入 250 μl 無水乙chun，吹打混勻,。

5. 將濾液混合物轉(zhuǎn)入 RNA 吸附柱中,，13,000 rpm 離心 2 min，此時,，RNA被吸附在膜上,，倒棄濾液,。

6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1 min,，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW（檢查是否已加乙chun）,，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液。

8. 重復(fù)步驟 7,。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中,，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun,。

10. 取出 RNA 吸附柱,，放入 1.5 ml RNase-free 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O,，室溫放置 1 min,，13,000 rpm 離心 1 min。

11.提取的總 RNA,，可直接用于下游實驗,，或于-70℃保存，以免降解,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有 qPCR 儀）

真菌總RNA提取試劑盒