多糖多酚植物總 RNA 提取試劑盒（gDNA 過濾器）

Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit

多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒

目錄號：91318

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個(gè)月,，不影響使用效果,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介

適用于快速提取各種植物根、莖,、葉,、花的總RNA，采用gDNA過濾器,，高效濾除gDNA,，得到的總RNA可直接用于RT，RT-PCR,，RT-qPCR,，普通轉(zhuǎn)錄組測序、RACE等,。

成功案例：棉花、海棠,、黑加侖,、煙草,、擬南芥、虎杖,、大豆,、草莓、冬青,、月季花雌蕊,、薔薇、沙棘,、冬棗,、蘆薈、仙人掌,、報(bào)春花,、水稻、玉米,、唐菖蒲,、櫻桃、白玉蘭,、毛白楊,、櫻花、葡萄,、百合花,、百合葉子雌蕊雄蕊、紫菜,、綠藻,、香蕉、水仙花,、青花菜,、地被菊、蘋果,、梅花,、番茄、石斛,、毛桃,、苧麻、慈姑,、葛根,、甘肅桃、玫瑰花,、檳榔果,、甜糖菊,、硅藻、牡丹,、胡楊,、油桐果、梨子皮,、板栗花序,、青皮云杉、紅樹根,、鐵線蕨,、黃瓜、小麥,、番木瓜,、甘薯、紫薯,、油松,、油茶、馬尾松,、蕪菁,、毛果楊、木薯,、大葉落地生根,、山杏、旱柳,、桉樹,、琵琶花果、麻風(fēng)樹,，沙生槐,、蕎麥...

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無毒：免lv仿、免β-巰基乙chun,！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全過程僅需 20min,！

操作步驟

第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入zhi定量無水乙chun,，詳見瓶身的標(biāo)簽。

提示：所有離心步驟必須在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行,。

1. 材料處理：

a．吸取 500 μl 裂解液 PRL,，轉(zhuǎn)入 1.5 ml 離心管中，再加入50 μl糖酚去除劑PAD，混勻備用,。

注意：糖酚去除劑 PAD 是提取多糖,、多酚、次級代謝產(chǎn)物多,、色素含量豐富的困難樣品bu可或缺的成分。對于幼嫩的農(nóng)作物葉片等簡單樣本,，不加糖酚去除劑 PAD,，RNA 的產(chǎn)量可能會提高一些。

b．液氮中研磨植物組織成細(xì)粉,，取≤50 mg 細(xì)粉轉(zhuǎn)入上述裝有 PRL 裂解液的離心管中, 劇烈渦旋震蕩 30 sec,，充分混勻。

冬天氣溫低,， 37℃搖床放置 3 min,，可增強(qiáng)裂解效果，提高產(chǎn)量

c．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min,，沉淀不能裂解的碎片,。

注意：使用 1ml 裂解液 PRL 和 100 μl 糖酚去除劑去裂解 100 mg 樣品，RNA 產(chǎn)量會翻倍,。

2. 小心吸取上清（一般 480 μl,，注意不要吸到沉淀）轉(zhuǎn)入一個(gè)新的 1.5 ml離心管，加入0.5倍體積（一般 240 μl）的無水乙chun, 吹打混勻,。

3. 每次轉(zhuǎn)移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中,，13,000 rpm 離心2 min，倒棄濾液,。此時(shí),，絕大部分gDNA 被濾除，RNA 和少量 gDNA殘留被吸附在膜上,，重復(fù)此過程,，直到混合液全部轉(zhuǎn)入gDNA 過濾器。

4. 取出步驟3的gDNA 過濾器,，放入一個(gè)新的 2 ml 離心管中,，加入 500μl裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 離心1 min,，收集濾液（RNA 在濾液中）,，向?yàn)V液中加入 250μl 無水乙chun，吹打混勻,。

5. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中,，13,000 rpm 離心 2 min，此時(shí)，RNA被吸附在膜上,，倒棄濾液,。

6. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 1min,，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW,，13,000 rpm 離心 30 sec,，倒棄濾液。

8. 重復(fù)步驟 7,。

9. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中,，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun,。

10. 取出 RNA 吸附柱,，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加30~50μl的RNase-free H₂O,，室溫放置 1 min,，13,000 rpm 離心 1 min。

11. 提取的總RNA,，可直接用于下游實(shí)驗(yàn),，或于-70℃保存，以免降解,。

附錄：

一,、液氮研磨（自動研磨儀）:

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 鋼珠 3 粒，放進(jìn)≤50 mg 樣本,，投入液氮中預(yù)冷,。把研磨模塊也丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢,。

b. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中,，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率,，震蕩 30~60 sec,。（以北京赫得京 N9548 為例）

c. 研磨完成后，馬上加 500μl 裂解液 PRL 和 50 μl 糖分去除劑 PAD,，劇烈渦旋30 sec,。

d. 將裂解物13,000 rpm 離心5~10 min，沉淀不能裂解的碎片,。

二,、免液氮直接研磨（自動研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在2.0 ml液氮研磨管中加入5 mm 鋼珠1粒,，加1ml裂解液 PRL和100μl PAD，放進(jìn)≤100 mg 樣本,，設(shè)置 60 個(gè)頻率,，震蕩 2 min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 5~10 min,，沉淀不能裂解的碎片,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

多糖多酚植物總RNA快速提取試劑盒