FlashPure Plus Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit

動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總 RNA 提取試劑盒（帶 gDNA 過濾器）

動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒

目錄號(hào)：91218

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無水乙chun

保存條件

室溫（15~25℃）,，有效期 12 個(gè)月,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

適用于快速提取各種動(dòng)物組織、細(xì)胞,、昆蟲的總 RNA,，gDNA 過濾器高效濾除 gDNA，RNA 可直接用于 RT,，RT-PCR,，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,、RACE 等,。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無毒：免lv仿,、免β-巰基乙chun！

2. 高質(zhì)：28s/18s=2:1,，OD260/280=2.0～2.2,！

3. 高效：提取全過程僅需 10 min！

重要提示：

① 第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液RW中加入無水乙醇，詳見標(biāo)簽,。

② 所有離心步驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jìn)行。

③ 高豐度樣本（肝臟,、脾臟、腎臟,、胰腺、心臟）的投入量減半,。

操作步驟：

1. 動(dòng)物組織,、昆蟲：

a．電動(dòng)勻漿：取新鮮組織 10~20 mg 加入 350μl的裂解液ARL Plus，電動(dòng)勻漿,，直到無明顯組織塊即可,。

b．液氮研磨：在液氮中研磨組織成細(xì)粉，取10~20 mg組織細(xì)粉加入350μl裂解液ARL Plus,，劇烈渦旋振蕩20sec,，充分裂解。

注意：裂解 20~30 mg 組織,，需要加入 600 μl 裂解液 ARL Plus,。

c． 將勻漿后裂解物13，000 rpm 離心3min,。

d．下接步驟 3,。

2. 細(xì)胞

a．懸浮細(xì)胞：收集<107懸浮細(xì)胞到一個(gè) 1.5ml 離心管；

貼壁細(xì)胞（培養(yǎng)皿培養(yǎng)）：wan全吸棄培養(yǎng)基后,，直接在培養(yǎng)皿中加入裂解液ARL Plus進(jìn)行消化,、裂解；

貼壁細(xì)胞（細(xì)胞瓶培養(yǎng)）：應(yīng)該先用胰蛋白mei消化后吹打下來收集,。

b．13,000 rpm 離心 10 sec,，wan全吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán),。

c．輕彈管底使細(xì)胞松散,，然后加入350μl（<5x106 細(xì)胞）或600μl（5x106-1x107細(xì)胞）裂解液 ARL Plus，渦旋振蕩,，充分混勻,。

d．下接步驟 3,。

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量表：（細(xì)胞數(shù)量＞1x107，請(qǐng)酌情增加裂解液的用量）

3. 將裂解物上清或者裂解物全部加到gDNA 過濾器上（過濾器放在收集管內(nèi)）,，立刻 13,000 rpm 離心1 min,，保留濾液（RNA 在濾液中）。

4. 向?yàn)V液中加入等體積（350μl / 600μl）的70%乙醇,，吹打混勻,。

5. 每次吸取≤750μl濾液混合物轉(zhuǎn)入一個(gè)RNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm離心1min,，倒棄濾液,。此時(shí)，RNA被吸附在膜上,，重復(fù)此過程,，直到溶液全部上柱。

6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室溫放置 1min,13,000 rpm 離心30sec,，倒棄濾液,。

7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 離心30sec,，倒棄濾液,。

8. 重復(fù)步驟7。

9. 把RNA吸附柱放回收集管中,，13,000rpm 離心2min,，che底除去膜上的乙醇。

10. 取出RNA吸附柱,，放入一個(gè)RNase-free 1.5ml離心管中,，向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase-Free H2O，室溫放置1 min,，13,000rpm離心 1 min,。

11. 得到的 RNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn),，或于-70℃保存,，以免降解。

附錄：

一,、免液氮直接研磨（自動(dòng)研磨儀）——適用于新鮮樣本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入4mm 兩粒,，加600μl裂解液ARL plus，放進(jìn)20 mg 左右的樣本,，設(shè)置65個(gè)頻率,，震蕩2min。

b. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片,。

二,、液氮研磨（自動(dòng)研磨儀）:

a. 把研磨模塊丟到液氮中預(yù)冷，直到?jīng)]有氣泡冒出視為預(yù)冷完畢,。

b. 在2.0ml液氮研磨管中放入3mm 鋼珠3粒,，放進(jìn)20-30mg 樣本，投入液氮中預(yù)冷,。

c. 把預(yù)冷好的離心管插入研磨模塊中,，放進(jìn)研磨儀，設(shè)置 55 個(gè)頻率,， 震蕩 30~60 sec,。（以北京赫得研磨儀——京 N9548 為例）

d. 研磨完成后，馬上加 600 μl 裂解液 ARL Plus,，劇烈渦旋振蕩,充分

混勻,。

e. 將裂解物 13,000 rpm 離心 3 min，沉淀不能裂解的碎片,。

相關(guān)產(chǎn)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)

動(dòng)物組織/細(xì)胞/昆蟲總RNA快速提取試劑盒