諾博萊德 過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒  抗逆系列

產(chǎn)品貨號：BC8878

產(chǎn)品名稱：過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒

英文名稱：Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

規(guī)格：50T/48S

檢測方法：可見分光光度法 Spectrophotometer

儲存條件：Store at 2-8℃,，6 months

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder BC8878過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit

POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物,、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類,、胺類毒性的雙重作用,。POD催化H₂O₂氧化特定底物，在470nm有特征光吸收,。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀,、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一,、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻)

1,、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,，功率200W，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次);8000g4℃離心10min，取上清,，置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液)，進行冰浴勻漿,。8000g4℃離心10min，取上清,，置冰上待測,。

2、血清(漿)樣本:直接檢測,。

注:該試劑盒的樣本勻漿上清也可用于BC0170/BC0175(超氧化物歧化酶)、BC5160/BC5165(超氧化物歧化酶),、BC0020/BC0025(丙二醛)、BC0200/BC0205(過氧化氫酶),、BC0680/BC0685(乳酸脫氫酶)的測定。

二,、測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零,。

2、測定前將試劑一,、試劑二工作液和試劑三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min。

在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,，立即混勻并計時,，記錄470nm下30s時的吸光值A(chǔ)1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2,。計算△A=A2-A1.

三,、POD 活性計算

1、血清(漿)POD活性

單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個酶活力單位,。

POD (U/mL) =ΔAxV 反總+V 樣+0.01+T-7133x△A

2、組織,、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個酶活力單位,。

POD(U/mg prot)=ΔAxV 反總÷ (V樣xCpr)+0.01+T=7133xΔA÷Cpr

(2)按樣本質(zhì)量計算

單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個酶活力單位。

POD(U/g質(zhì)量)=ΔAxV 反總+(WxV樣+V 樣總)+0.01+T =7133xΔA+W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

單位定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470nm變化0.01為一個酶活力單位。

POD (U/10⁴cell) =ΔAxV 反總+(500xV樣+V樣總)+0.01+T=14.27x△A

V反總:反應(yīng)體系總體積，1.07mL:V樣:加入樣本體積,，0.015mL:V樣總:加入提取液體積，1mL:T:反應(yīng)時間,，1min:Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL:W:樣本質(zhì)量,，g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬,。

注意事項:

1.若一次性測定樣本較多，可將試劑一,、試劑二工作液、試劑三和蒸餾水按比例配成混合液,，在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上,，測定時加入15μL樣本和1055μL混合液測定。

2.如果△A小于0.005,，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果△A大于0.5或者反應(yīng)液中有較多氣泡產(chǎn)生,，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒  抗逆系列

產(chǎn)品訂購信息：

BC8878過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒 Peroxidase(POD) Activity Assay Kit 50T/48S