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MEG-01 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 (STR鑒定正確)

細(xì)胞介紹

 MEG-01細(xì)胞株源自一位CML患者成巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)換期的骨髓細(xì)胞。細(xì)胞質(zhì)因子VIII和表面球蛋白IIb/IIIa,，高碘酸-Schiff(PAS)反應(yīng),，α醋酸萘酯酶和酸性磷酸酶陽性。髓過氧化物酶,，α丁酸萘酯酶,，氯化醋酸AS-D萘苯酚酯酶和堿性磷酸酶陰性。用單克隆抗體BA-1(抗B細(xì)胞,，粒性白細(xì)胞),，HPL-3(抗球蛋白IIb/IIIa)和20.3(抗單核細(xì)胞,，血小板)染色成陽性,。其他淋巴和骨髓類抗體成陰性,。

細(xì)胞特性

1） 來源：人成巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)換期的骨髓細(xì)胞

2） 形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣；圓形,，懸浮生長

3） 含量：>1x106 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用,。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理

1） 收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3） 懸浮細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基）,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞,，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加專用培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài),，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長,。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,，離心5min，棄去上清,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用,。

下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存,。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

MEG-01 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 (STR鑒定正確)