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上海語純生物科技有限公司
初級會員·1年BH0256SW620/5FU人結(jié)直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株
| 參考價: | 面議 |
具體成交價以合同協(xié)議為準- BH0256 產(chǎn)品型號
- 語純生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù)：28更新時間：2025-04-29 13:40:32
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10^6 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | BH0256 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
產(chǎn)品貨號：BH0256
產(chǎn)品規(guī)格：1×10^6
本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或進一步生產(chǎn)使用,，不可用于臨床診斷或治療,。
產(chǎn)品介紹
SW620/5FU人結(jié)直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株(STR鑒定）
細胞介紹
SW620是從一個51歲男性白人組織中分離得到。 由A.Leibovitz等從一個淋巴結(jié)建株,。細胞系主要由無絨毛的小園球細胞和雙極細胞組成,。它僅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。
細胞特性
（1）來源：結(jié)直腸腺癌,，來自轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)
（2）形態(tài)：上皮細胞樣 貼壁生長
（3）含量：>1×106細胞數(shù)
（4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
（5）用途：僅供科研使用
運輸和保存：干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的專用培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代
1,、細胞培養(yǎng)條件及相關(guān)試劑的配制
（1）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，100%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
（2）準備L15培養(yǎng)基：優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,；雙抗,，1% ，可添加5-Fu濃度為：400~1065uM,；
注意：1. 細胞在傳代和剛復(fù)蘇時較為脆弱,，中止液須為不含5-Fu的專用培養(yǎng)基，且在細胞未貼壁期間和貼壁前期需用不含5-Fu的專用培養(yǎng)基,，待細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定時再根據(jù)需要濃度添加5-Fu,。
2.若細胞生長狀態(tài)較為緩慢時，可適當(dāng)降低5-Fu的濃度,，或使用不含5-Fu的專用培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時,，再更換為所需的5-Fu濃度。
（3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1） 凍存細胞的復(fù)蘇：：
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，專用培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。
注意：如還有部分細胞未消化下來,，可采用分步消化：
a. 準備一個無菌的15mL離心管,，加入2mL含10%FBS的專用培養(yǎng)基,；
b.將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打）,；
c.向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入1mL 0.25%胰蛋白酶繼續(xù)消化2min左右，輕拍培養(yǎng)瓶,，95%左右細胞脫落后加入2mL含10%FBS的專用培養(yǎng)基中和,，中和后的細胞懸液移入①中的離心管內(nèi)。
3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行,。
3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。下面T25瓶為例；
1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml ,，細胞凍存建議每瓶T25凍一支,。
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱,、代數(shù),、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。
注意事項：
1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護,，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏,，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。
SW620/5FU人結(jié)直腸癌細胞氟尿嘧啶耐藥株(STR鑒定）
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