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MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞（STR鑒定）

細(xì)胞介紹

1976年R. Cailleau等從一位48歲白人女性腫瘤轉(zhuǎn)移患者胸水中建立了MDA-MB-453細(xì)胞株,，其它轉(zhuǎn)移灶包括淋巴結(jié),，腦和胸水及心包腔積水。該細(xì)胞過(guò)表達(dá)FGF受體,。

細(xì)胞特性

1） 來(lái)源：乳腺,；源自轉(zhuǎn)移灶：心包積液

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，混合生長(zhǎng),，貼壁與懸浮細(xì)胞同時(shí)存在,。

3） 含量：>1x106細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存：干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作,。

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?/span>4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù),。

3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸?。?/span>細(xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況,，若細(xì)胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用專用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長(zhǎng)70%-90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代,，傳代時(shí)需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收,。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。                       

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備L-15培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,；雙抗，1%,。

2） 培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，100%；該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO_2,， 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

注意事項(xiàng)：

a. 無(wú)CO₂培養(yǎng),。如果沒(méi)有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的,，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來(lái)培養(yǎng),，培養(yǎng)過(guò)程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。

b. 細(xì)胞形態(tài)是貼壁生長(zhǎng)及懸浮生長(zhǎng)混合,，貼壁細(xì)胞形態(tài)是上皮樣（立方形或多邊形）,，但也有一些單個(gè)或成團(tuán)的懸浮細(xì)胞。

c. 細(xì)胞復(fù)蘇后一段時(shí)間內(nèi),，貼壁不牢,，大部分細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)，懸浮細(xì)胞不要丟棄,，換液或傳代時(shí)可以將懸浮細(xì)胞收集離心后,，重新加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，繼續(xù)培養(yǎng),。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

該細(xì)胞為輕微貼壁和懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間）,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。

3. 將收集到的懸浮細(xì)胞,、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來(lái)的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min,，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的專用培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例,；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度,。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱、代數(shù),、日期等信息,。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜,，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存,。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)：

 1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏,，并會(huì)慢慢充滿液氮,。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子,，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害,。

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