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MM.1S人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞（STR鑒定）

細(xì)胞描述

該細(xì)胞系的母細(xì)胞株MM.1是從一位對類固醇療法產(chǎn)生抗藥性的多發(fā)性骨髓瘤患者的外周血中建立的,。MM.1S是從MM.1中分離出來的,，對地塞米松敏感,。該細(xì)胞復(fù)蘇后需要兩周左右才能恢復(fù)正常生長,。

細(xì)胞特性

1） 來源：人,、女性,、外周血

2） 形態(tài)：成淋巴瘤細(xì)胞，懸浮和輕微的貼壁同時存在

3） 含量：>1x106細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用,。

運輸和保存：干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系,。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,，請拍照后及時聯(lián)系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）半貼細(xì)胞和貼壁不牢（懸?。┘?xì)胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,，顯微鏡下觀察細(xì)胞的情況，若細(xì)胞密度在60%以下,，客戶需收集T25瓶中的懸浮細(xì)胞離心后用專用培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，若細(xì)胞生長70%-90%對細(xì)胞進(jìn)行傳代,，傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細(xì)胞離心后回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基,優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %,，P/S青霉素-鏈霉素 1%

2） 注意事項：

a.該細(xì)胞同時存在懸浮生長和輕微的貼壁狀態(tài)。

b.該細(xì)胞復(fù)蘇后需培養(yǎng)2周左右時間,，才能恢復(fù)正常生長狀態(tài),。

c.細(xì)胞密度不可過高,，在細(xì)胞匯合前進(jìn)行傳代，過度融合生長細(xì)胞容易產(chǎn)生死細(xì)胞團(tuán),。

3） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

4） 凍存液：90%血清,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． 細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL專用培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液,，專用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml專用培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜,。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度,。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞,，傳代可以參考以下方法：

該細(xì)胞是一種混合生長的細(xì)胞；細(xì)胞既可以以輕度附著的單層形式生長,，也可以以懸浮液形式生長,。可以通過添加新鮮培養(yǎng)基來維持培養(yǎng),?；蛘撸梢酝ㄟ^將貼壁細(xì)胞用細(xì)胞刮鏟刮入含有漂浮細(xì)胞的培養(yǎng)基中,，通過離心收集細(xì)胞,，將細(xì)胞沉淀重懸于新鮮培養(yǎng)基中并分配到新的培養(yǎng)瓶中來對細(xì)胞進(jìn)行傳代。建議收貨后的第一次傳代密度為1:2進(jìn)行,。后續(xù)的傳代可根據(jù)實際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行,。

3） 細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例,；

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集細(xì)胞到離心管中,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,，標(biāo)注好名稱,、代數(shù)、日期等信息,。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。

注意事項：

 1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套,、衣服和戴上防護(hù)面罩,。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮,。解凍時,，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害,。

MM.1S人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞（STR鑒定）